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目的观察“痰瘀同治”法对糖尿病大鼠心肌氧化应激反应的干预作用,以复方抵当陷胸汤(经方抵当汤和小陷胸汤合方)为主,观察在糖尿病心肌病程中与氧化应激反应中活性氧产生密切相关的NADPH氧化酶相关指标,探究“痰瘀同治”法干预氧化应激、改善糖尿病大鼠心肌病变的作用机制,为临床中治疗糖尿病心肌病提供客观理论依据。方法实验选取清洁级雄性SD大鼠100只,体质量240±20g,适应性正常喂养7-10天后,随机分为正常组15只和实验组85只。实验组大鼠禁食但不禁水,喂养24h后,腹腔注射链脲佐菌素溶液(STZ),一次性注射量55mg/kg,建立糖尿病模型。恢复正常进食喂养72h后,在存活的实验组大鼠身上,取尾静脉血,以血糖仪测量各个大鼠的血糖,选取血糖>16.7mmol/L的大鼠,符合糖尿病模型。继续正常喂养三周后,观察大鼠心肌病变,最终有60只符合糖尿病心肌病要求。将造模成功大鼠分笼喂养,并随机分为:模型(MC)组、痰瘀同治(RPDBS)组、化痰(RP)组、化瘀(DBS)组、阿拉氯胺(ALT-711)组,每组12只。各组大鼠给药方式及相关剂量:正常组和模型组,每日均灌胃蒸馏水1.0 ml/100g;痰瘀同治组以抵当陷胸汤,每日灌胃剂量4.05 g/kg;化痰组以小陷胸汤,每日灌胃剂量7.02 g/kg;化瘀组以血府逐瘀汤,每日灌胃剂量8.10 g/kg;阿拉氯胺组以现用现配的ALT-711水溶液,每日灌胃剂量0.3 mg/100g。连续给药8周,每日固定上午一个确定时间(9点)灌胃,第8周末给药完成后,麻醉所有大鼠取材。(1)边进行实验研究,边观察各组实验动物(DCM大鼠)的一般情况,一般每7天检测并记录体重、血糖等信息,做好备案。(2)“痰瘀同治”法对DCM大鼠心肌NADPH氧化酶相关指标的影响:(1)Western blot法检测NOX2、NOX4、p22phox、p47phox蛋白表达水平;(2)实时荧光定量PCR法检测NOX2、NOX4、p22phox、p47phox基因表达水平。(3)“痰瘀同治”法对DCM大鼠心肌心肌超氧阴离子和一氧化氮含量的影响:比色法测定心肌超氧阴离子和一氧化氮水平。结果(1)正常组大鼠喂养过程中,发育良好,精神状态良好,活动力正常,每日正常进食及排便,气味不大;模型组大鼠情况较差,饮食增多且排便气味较大,毛色不亮,活动力较差,发育较正常组瘦弱,体重明显减轻(P<0.01);以“痰瘀同治”法、“化痰”法、“化瘀”法及ALT-711,各药物干预后,相比模型组大鼠,各给药组的精神状态、活动力、毛色均有所改善,实验结束时的体重,较模型组增加(P<0.01),其中以痰瘀同治组和阿拉氯胺组改善较为明显。(2)“痰瘀同治”法对DCM大鼠心肌NADPH氧化酶相关指标的影响结果:(1)还原性氧化酶NOX2、p22phox蛋白和基因表达水平:MC组较NC组,心肌组织还原性氧化酶NOX2、p22phox蛋白和基因表达水平均上调(P<0.01);各用药组较之MC组,心肌组织还原性氧化酶NOX2、p22phox蛋白和基因表达均下调(P<0.05,P<0.01);各用药组组间比较,RPDBS组较RP组和DBS组的NOX2、p22phox蛋白和基因表达下调明显(P<0.05,P<0.01),ALT-711组较RPDBS组有所下调(P<0.05)。(2)还原性氧化酶NOX4、p47phox蛋白和基因表达水平:MC组较NC组,心肌组织还原性氧化酶NOX4、p47phox蛋白和基因表达水平均上调(P<0.01);各用药组较之MC组,心肌组织还原性氧化酶NOX4、p47phox蛋白和基因表达均下调(P<0.05,P<0.01);各用药组组间比较,RPDBS组较RP组和DBS组的NOX4、p47phox蛋白和基因表达下调明显(P<0.05,P<0.01),ALT-711组较RPDBS组有所下调(P<0.05)。(3)“痰瘀同治”法对DCM大鼠心肌超氧化物阴离子和一氧化氮的影响结果:(1)心肌组织超氧阴离子表达水平:MC组较NC组,心肌组织超氧阴离子表达水平上调(P<0.01);各用药组较之MC组,心肌组织超氧阴离子表达均下调(P<0.01);各给药干预组间比较,RPDBS组较RP组和DBS组超氧阴离子表达下调明显(P<0.01),ALT-711组较RPDBS组有所下调(P<0.05)。(2)一氧化氮表达水平:MC组较NC组,血浆一氧化氮表达水平下降(P<0.01);各用药组较之MC组,血浆一氧化氮表达均上调(P<0.05,P<0.01);各给药干预组间比较,RPDBS组较RP组和DBS组血浆一氧化氮表达上调明显(P<0.01),ALT-711组较RPDBS组有所上调(P<0.05)。结论(1)“痰瘀同治”的合方抵当陷胸汤对糖尿病心肌病大鼠的生长发育和一般情况改善明显。(2)“痰瘀同治”法可以有效地干预糖尿病心肌病变中氧化应激反应,其机制可能与抑制NOX2、NOX4、p22phox、p47phox及超氧阴离子产生,增强抗氧化的NO活性有关,从而减轻DCM中氧化应激造成的心肌损伤。(3)“痰瘀同治”的合方抵当陷胸汤对DCM大鼠心肌的氧化应激病变改善作用最佳,较单纯“化痰”和“化瘀”方法,效果明显增加。