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[目的]
1.观察低氘水对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞增殖、凋亡、周期、侵袭和转移能力的影响，并研究其可能的相关机制。
2.探讨低氘水对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞中miRNAlet-7b表达的诱导作用。
3.观察miRNAlet-7b对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞增殖、凋亡、周期的影响。
4.探究在人肝癌Huh-7、Hep3B细胞中miRNAlet-7b对Bcl-xl靶向调控作用。
5.观察低氘水和miRNAlet-7b对BALB/c裸鼠皮下移植瘤成瘤能力的影响，以及移植瘤中Bcl-xl和Bak蛋白的表达水平。
[方法]
1.低氘水在体外对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞和人正常肝L-O2细胞增殖、凋亡、周期、侵袭和转移能力的影响，以及在体内对BALB/c裸鼠皮下移植瘤成瘤能力的影响。
(1)CCK-8法检测不同氘浓度的低氘水对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞和人正常肝L-O2细胞增殖的抑制作用。
(2)平板克隆实验比较不同氘浓度的低氘水作用于人肝癌Huh-7、Hep3B细胞和人正常肝L-O2细胞后形成的克隆集落数的差异。
(3)划痕实验检测不同氘浓度的低氘水对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞和人正常肝L-O2细胞迁移能力的影响。
(4)Transwell实验检测不同氘浓度的低氘水对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞和人正常肝L-O2细胞侵袭、迁移能力的影响。
(5)DAPI染色检测不同氘浓度的低氘水对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞和人正常肝L-O2细胞凋亡的影响。
(6)超微量ATP酶检测实验检测不同氘浓度的低氘水对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞和人正常肝L-O2细胞ATP酶活力的影响。
(7)流式细胞仪检测不同氘浓度的低氘水对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞和人正常肝L-O2细胞凋亡及细胞周期分布的影响。
(8)Westernblot实验检测不同氘浓度的低氘水对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞和人正常肝L-O2细胞Bcl-xl、Bak、Bcl-2、Bax、Mcl-1、Phospho-Bcl-2(Thr56)、Phospho-Bcl-2(Ser70)、PARP、CleavedPARP、CleavedCaspase-3蛋白表达的影响。
(9)裸鼠皮下成瘤实验观察低氘水对BALB/c裸鼠皮下移植瘤成瘤能力的影响。
(10)HE染色实验对裸鼠皮下移植瘤进行病理学观察。
(11)Westernblot检测各组裸鼠皮下移植瘤中Bcl-xl、Bak蛋白的表达水平。
(12)免疫组织化学法检测各组裸鼠皮下移植瘤中Bcl-xl、Bak蛋白的表达变化。
2.低氘水诱导上调的miRNAlet-7b靶基因预测和其对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞凋亡的影响，以及稳定过表达miRNAlet-7b的Huh-7、Hep3B细胞在BALB/c裸鼠皮下的成瘤能力。
(1)QPCR(Real-timeQuantitativePCRDetectingSystem)验证人肝癌Huh-7、Hep3B细胞与人正常肝L-O2细胞中miRNAlet-7b的表达水平差异，以及经低氘水作用后，Huh-7、Hep3B细胞中miRNAlet-7b的表达情况。
(2)瞬时转染mimicsNon-targetControl、inhibitorNon-targetControl、miRNAlet-7bmimics、miRNAlet-7binhibitor至人肝癌Huh-7、Hep3B细胞中，运用QPCR对miRNAlet-7b的表达进行验证。
(3)构建稳定过表达miRNAlet-7b和NegativeControl的Hep3B、Huh-7细胞株，运用QPCR对其表达进行验证；分别命名为Huh-7-NC、Huh-7-let-7b、Hep3B-NC、Hep3B-let-7b。
(4)生物信息学预测hsa-miRNAlet-7b的靶基因及其功能。
(5)双荧光素酶实验验证miRNAlet-7b靶向调控Bcl-xl。
(6)QPCR检测miRNAlet-7bmimics和inhibitor转染人肝癌Huh-7、Hep3B细胞后Bcl-xlmRNA、BakmRNA的转录水平。
(7)Westernblot检测miRNAlet-7bmimics和inhibitor转染人肝癌Hep3B、Huh-7细胞后Bcl-xl、Bak蛋白的表达变化。
(8)平板克隆实验比较在相同的条件下肝癌细胞株Huh-7、Huh-7-NC、Huh-7-let-7b或Hep3B、Hep3B-NC、Hep3B-let-7b形成的克隆集落数的差异。
(9)CCK-8法检测转染miRNAlet-7bmimics和inhibitor后对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞增殖的影响。
(10)EdU细胞增殖试剂盒检测转染miRNAlet-7bmimics和inhibitor后对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞增殖的影响。
(11)DAPI染色检测转染miRNAlet-7bmimics和inhibitor后对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞凋亡的影响。
(12)超微量ATP酶检测实验检测转染miRNAlet-7bmimics和inhibitor后对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞ATP酶活力的影响。
(13)流式细胞仪检测转染miRNAlet-7bmimics和inhibitor后对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞周期分布、细胞凋亡以及细胞线粒体膜电位的影响。
(14)BALB/c裸鼠皮下移植瘤实验观察Huh-7-NC、Huh-7-let-7b、Hep3B-NC、Hep3B-let-7b细胞组在体内生长的情况。
(15)HE染色实验对裸鼠皮下移植瘤进行病理学观察。
(16)Westernblot检测各组裸鼠皮下移植瘤中Bcl-xl、Bak蛋白的表达水平。
(17)免疫组织化学法检测裸鼠皮下移植瘤中Bcl-xl、Bak蛋白的表达变化。
[结果]
1.低氘水能抑制人肝癌Huh-7、Hep3B细胞增殖及导致细胞周期阻滞
CCK-8法、平板克隆形成实验结果显示随着DDW中氘浓度下降，人肝癌Huh-7、Hep3B细胞增殖能力被抑制(P<0.01)；PI单染细胞周期检测结果显示在DDW的作用下，人肝癌Huh-7、Hep3B细胞的生长周期阻滞:G1期增加，S期减少(P<0.01)。而对于人正常肝L-O2细胞，DDW对其增殖影响不明显(P>0.05)。
2.低氘水能抑制人肝癌Huh-7、Hep3B细胞迁移和侵袭
伤口划痕实验和Transwell细胞迁移实验结果显示随着DDW中氘浓度下降，人肝癌Huh-7、Hep3B细胞的活动能力也随之下降(P<0.01)。而DDW不影响人正常肝L-O2细胞的活动能力(P>0.05)。
3.低氘水能促进人肝癌Huh-7、Hep3B细胞凋亡
经DDW处理后的人肝癌Huh-7、Hep3B细胞，DAPI染色后观察到胞内染色质固缩、凝聚、核碎裂等现象，细胞出现早期凋亡的典型特征；超微量ATP酶活力检测实验结果显示随着氘浓度的降低，肝癌细胞的Na+k+-ATPase、Ca2+Mg2+-ATPase和Total-ATPase活力均出现不同程度的下降，其中Na+k+-ATPase变化较为明显(P<0.01)；AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡实验进一步证实了随着氘浓度的降低，人肝癌Huh-7、Hep3B细胞的凋亡率随着升高(P<0.01)。而DDW不影响人正常肝L-O2细胞的凋亡(P>0.05)。
4.低氘水能影响人肝癌Huh-7、Hep3B细胞中凋亡相关蛋白的表达
Westernblot检测结果显示低氘水能引起人肝癌Huh-7、Hep3B细胞中Bcl-xl、Bcl-2、Mcl-1、PARP蛋白表达下调，以及Bak、Bax、Phospho-Bcl-2(Thr56)、Phospho-Bcl-2(Ser70)、CleavedPARP、CleavedCaspase-3蛋白表达上调(P<0.05)。
5.低氘水能抑制裸鼠皮下移植瘤(人肝癌Huh-7、Hep3B细胞)的生长(P<0.05)，且不影响裸鼠的体重。移植瘤经过HE染色后,在显微镜下可见细胞形状大小不一，核大深染，核异型及病理分裂像明显,确定为恶性肿瘤组织。Westernblot实验和免疫组织化学法检测结果显示，经低氘水喂养的裸鼠皮下移植瘤中Bcl-xl蛋白表达明显减少(P<0.01)，而Bak蛋白表达水平提高(P<0.01)。
6.低氘水能诱导人肝癌Huh-7、Hep3B细胞中miRNAlet-7b的表达
通过QPCR验证人正常肝L-O2细胞miRNAlet-7b的表达比人肝癌Huh-7、Hep3B细胞分别高出4.16和2.94倍(P<0.01)。经50ppm低氘水培养基处理的人肝癌Huh-7、Hep3B细胞与对照组(150ppm)相比，miRNAlet-7b升高约1.5倍(P<0.01)。
7.人肝癌Huh-7、Hep3B细胞中miRNAlet-7b对Bcl-xl靶向调控作用
通过生物信息学预测靶基因、双荧光素酶报告基因检测实验、QPCR和Westernblot实验，结果显示miRNAlet-7b既可以在转录水平调控Bcl-xl靶基因，也可在翻译水平调控靶蛋白表达(P<0.05)。
8.过表达的miRNAlet-7b能抑制人肝癌Huh-7、Hep3B细胞增殖及抑制细胞周期进展
平板克隆形成实验、CCK-8法、EdU细胞增殖检测实验结果显示过表达的miRNAlet-7b能抑制人肝癌Huh-7、Hep3B细胞增殖(P<0.01)；PI单染细胞周期检测过表达的miRNAlet-7b能导致人肝癌Huh-7、Hep3B细胞生长周期阻滞，主要表现为G1期增加，S期减少(P<0.01)。
9.过表达的miRNAlet-7b能促进人肝癌Huh-7、Hep3B细胞凋亡
过表达miRNAlet-7b的肝癌Huh-7、Hep3B细胞株，DAPI染色后观察到胞内染色质固缩、凝聚、核碎裂等现象，细胞出现早期凋亡的典型特征；超微量ATP酶活力检测实验结果显示miRNAlet-7b的过表达导致肝癌Huh-7、Hep3B细胞的Na+k+-ATPase、Ca2+Mg2+-ATPase和Total-ATPase活力出现不同程度的下降，其中Na+k+-ATPase变化较为明显(P<0.01)；JC-1单染流式细胞术检测结果显示miRNAlet-7b的过表达导致肝癌Huh-7、Hep3B细胞的线粒体膜电位下降(P<0.01)；AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡实验进一步证实了miRNAlet-7b的过表达导致肝癌Huh-7、Hep3B细胞的凋亡率升高(P<0.01)。
10.过表达的miRNAlet-7b能抑制裸鼠皮下移植瘤(人肝癌Huh-7、Hep3B细胞)的生长(P<0.01)。移植瘤经过HE染色后,在显微镜下可见细胞形状大小不一，核大深染，核异型及病理分裂像明显,确定为恶性肿瘤组织。Westernblot实验和免疫组织化学法检测结果显示，过表达miRNAlet-7b的裸鼠皮下移植瘤中Bcl-xl蛋白表达明显减少(P<0.01)，而Bak蛋白表达水平提高(P<0.01)。
[结论]
1.低氘水具有抑制人肝癌Huh-7、Hep3B细胞增殖、迁移与侵袭，促进凋亡等生物效应，且随着氘浓度的减低，抑制效果越明显，但当氘浓度降到50ppm时，再降低氘浓度，抑制效果变化不大。此外，低氘水对人正常肝L-O2细胞无明显作用。
2.低氘水可调控凋亡相关蛋白Bcl-xl、Bak、Bcl-2、Phospho-Bcl-2(Thr56)、Phospho-Bcl-2(Ser70)、Bax、PARP、CleavedPARP、CleavedCaspase-3的表达，抑制人肝癌Huh-7、Hep3B细胞增殖，促进其凋亡。
3.低氘水具有抑制裸鼠皮下移植瘤(人肝癌Huh-7、Hep3B细胞)生长的作用，并且不影响裸鼠的体重和生活状态，其抑癌机制可能是通过调控凋亡相关蛋白Bcl-xl及Bak的表达。
4.低氘水能诱导人肝癌Huh-7、Hep3B细胞中miRNAlet-7b的表达。与人正常肝L-O2细胞相比，miRNAlet-7b在人肝癌Huh-7、Hep3B细胞中呈低表达。
5.在人肝癌Huh-7、Hep3B细胞中过表达的miRNAlet-7b既可以在转录水平调控Bcl-xl靶基因，也可在翻译水平调控靶蛋白表达。
6.过表达的miRNAlet-7b能抑制人肝癌Huh-7、Hep3B细胞增殖，导致细胞周期阻滞以及促进细胞凋亡等生物效应。
7.过表达的miRNAlet-7b可抑制裸鼠皮下移植瘤(人肝癌Huh-7、Hep3B细胞)的生长发展，其抑癌机制可能是通过调控凋亡相关蛋白Bcl-xl及Bak的表达。
1.观察低氘水对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞增殖、凋亡、周期、侵袭和转移能力的影响，并研究其可能的相关机制。
2.探讨低氘水对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞中miRNAlet-7b表达的诱导作用。
3.观察miRNAlet-7b对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞增殖、凋亡、周期的影响。
4.探究在人肝癌Huh-7、Hep3B细胞中miRNAlet-7b对Bcl-xl靶向调控作用。
5.观察低氘水和miRNAlet-7b对BALB/c裸鼠皮下移植瘤成瘤能力的影响，以及移植瘤中Bcl-xl和Bak蛋白的表达水平。
[方法]
1.低氘水在体外对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞和人正常肝L-O2细胞增殖、凋亡、周期、侵袭和转移能力的影响，以及在体内对BALB/c裸鼠皮下移植瘤成瘤能力的影响。
(1)CCK-8法检测不同氘浓度的低氘水对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞和人正常肝L-O2细胞增殖的抑制作用。
(2)平板克隆实验比较不同氘浓度的低氘水作用于人肝癌Huh-7、Hep3B细胞和人正常肝L-O2细胞后形成的克隆集落数的差异。
(3)划痕实验检测不同氘浓度的低氘水对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞和人正常肝L-O2细胞迁移能力的影响。
(4)Transwell实验检测不同氘浓度的低氘水对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞和人正常肝L-O2细胞侵袭、迁移能力的影响。
(5)DAPI染色检测不同氘浓度的低氘水对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞和人正常肝L-O2细胞凋亡的影响。
(6)超微量ATP酶检测实验检测不同氘浓度的低氘水对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞和人正常肝L-O2细胞ATP酶活力的影响。
(7)流式细胞仪检测不同氘浓度的低氘水对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞和人正常肝L-O2细胞凋亡及细胞周期分布的影响。
(8)Westernblot实验检测不同氘浓度的低氘水对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞和人正常肝L-O2细胞Bcl-xl、Bak、Bcl-2、Bax、Mcl-1、Phospho-Bcl-2(Thr56)、Phospho-Bcl-2(Ser70)、PARP、CleavedPARP、CleavedCaspase-3蛋白表达的影响。
(9)裸鼠皮下成瘤实验观察低氘水对BALB/c裸鼠皮下移植瘤成瘤能力的影响。
(10)HE染色实验对裸鼠皮下移植瘤进行病理学观察。
(11)Westernblot检测各组裸鼠皮下移植瘤中Bcl-xl、Bak蛋白的表达水平。
(12)免疫组织化学法检测各组裸鼠皮下移植瘤中Bcl-xl、Bak蛋白的表达变化。
2.低氘水诱导上调的miRNAlet-7b靶基因预测和其对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞凋亡的影响，以及稳定过表达miRNAlet-7b的Huh-7、Hep3B细胞在BALB/c裸鼠皮下的成瘤能力。
(1)QPCR(Real-timeQuantitativePCRDetectingSystem)验证人肝癌Huh-7、Hep3B细胞与人正常肝L-O2细胞中miRNAlet-7b的表达水平差异，以及经低氘水作用后，Huh-7、Hep3B细胞中miRNAlet-7b的表达情况。
(2)瞬时转染mimicsNon-targetControl、inhibitorNon-targetControl、miRNAlet-7bmimics、miRNAlet-7binhibitor至人肝癌Huh-7、Hep3B细胞中，运用QPCR对miRNAlet-7b的表达进行验证。
(3)构建稳定过表达miRNAlet-7b和NegativeControl的Hep3B、Huh-7细胞株，运用QPCR对其表达进行验证；分别命名为Huh-7-NC、Huh-7-let-7b、Hep3B-NC、Hep3B-let-7b。
(4)生物信息学预测hsa-miRNAlet-7b的靶基因及其功能。
(5)双荧光素酶实验验证miRNAlet-7b靶向调控Bcl-xl。
(6)QPCR检测miRNAlet-7bmimics和inhibitor转染人肝癌Huh-7、Hep3B细胞后Bcl-xlmRNA、BakmRNA的转录水平。
(7)Westernblot检测miRNAlet-7bmimics和inhibitor转染人肝癌Hep3B、Huh-7细胞后Bcl-xl、Bak蛋白的表达变化。
(8)平板克隆实验比较在相同的条件下肝癌细胞株Huh-7、Huh-7-NC、Huh-7-let-7b或Hep3B、Hep3B-NC、Hep3B-let-7b形成的克隆集落数的差异。
(9)CCK-8法检测转染miRNAlet-7bmimics和inhibitor后对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞增殖的影响。
(10)EdU细胞增殖试剂盒检测转染miRNAlet-7bmimics和inhibitor后对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞增殖的影响。
(11)DAPI染色检测转染miRNAlet-7bmimics和inhibitor后对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞凋亡的影响。
(12)超微量ATP酶检测实验检测转染miRNAlet-7bmimics和inhibitor后对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞ATP酶活力的影响。
(13)流式细胞仪检测转染miRNAlet-7bmimics和inhibitor后对人肝癌Huh-7、Hep3B细胞周期分布、细胞凋亡以及细胞线粒体膜电位的影响。
(14)BALB/c裸鼠皮下移植瘤实验观察Huh-7-NC、Huh-7-let-7b、Hep3B-NC、Hep3B-let-7b细胞组在体内生长的情况。
(15)HE染色实验对裸鼠皮下移植瘤进行病理学观察。
(16)Westernblot检测各组裸鼠皮下移植瘤中Bcl-xl、Bak蛋白的表达水平。
(17)免疫组织化学法检测裸鼠皮下移植瘤中Bcl-xl、Bak蛋白的表达变化。
[结果]
1.低氘水能抑制人肝癌Huh-7、Hep3B细胞增殖及导致细胞周期阻滞
CCK-8法、平板克隆形成实验结果显示随着DDW中氘浓度下降，人肝癌Huh-7、Hep3B细胞增殖能力被抑制(P<0.01)；PI单染细胞周期检测结果显示在DDW的作用下，人肝癌Huh-7、Hep3B细胞的生长周期阻滞:G1期增加，S期减少(P<0.01)。而对于人正常肝L-O2细胞，DDW对其增殖影响不明显(P>0.05)。
2.低氘水能抑制人肝癌Huh-7、Hep3B细胞迁移和侵袭
伤口划痕实验和Transwell细胞迁移实验结果显示随着DDW中氘浓度下降，人肝癌Huh-7、Hep3B细胞的活动能力也随之下降(P<0.01)。而DDW不影响人正常肝L-O2细胞的活动能力(P>0.05)。
3.低氘水能促进人肝癌Huh-7、Hep3B细胞凋亡
经DDW处理后的人肝癌Huh-7、Hep3B细胞，DAPI染色后观察到胞内染色质固缩、凝聚、核碎裂等现象，细胞出现早期凋亡的典型特征；超微量ATP酶活力检测实验结果显示随着氘浓度的降低，肝癌细胞的Na+k+-ATPase、Ca2+Mg2+-ATPase和Total-ATPase活力均出现不同程度的下降，其中Na+k+-ATPase变化较为明显(P<0.01)；AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡实验进一步证实了随着氘浓度的降低，人肝癌Huh-7、Hep3B细胞的凋亡率随着升高(P<0.01)。而DDW不影响人正常肝L-O2细胞的凋亡(P>0.05)。
4.低氘水能影响人肝癌Huh-7、Hep3B细胞中凋亡相关蛋白的表达
Westernblot检测结果显示低氘水能引起人肝癌Huh-7、Hep3B细胞中Bcl-xl、Bcl-2、Mcl-1、PARP蛋白表达下调，以及Bak、Bax、Phospho-Bcl-2(Thr56)、Phospho-Bcl-2(Ser70)、CleavedPARP、CleavedCaspase-3蛋白表达上调(P<0.05)。
5.低氘水能抑制裸鼠皮下移植瘤(人肝癌Huh-7、Hep3B细胞)的生长(P<0.05)，且不影响裸鼠的体重。移植瘤经过HE染色后,在显微镜下可见细胞形状大小不一，核大深染，核异型及病理分裂像明显,确定为恶性肿瘤组织。Westernblot实验和免疫组织化学法检测结果显示，经低氘水喂养的裸鼠皮下移植瘤中Bcl-xl蛋白表达明显减少(P<0.01)，而Bak蛋白表达水平提高(P<0.01)。
6.低氘水能诱导人肝癌Huh-7、Hep3B细胞中miRNAlet-7b的表达
通过QPCR验证人正常肝L-O2细胞miRNAlet-7b的表达比人肝癌Huh-7、Hep3B细胞分别高出4.16和2.94倍(P<0.01)。经50ppm低氘水培养基处理的人肝癌Huh-7、Hep3B细胞与对照组(150ppm)相比，miRNAlet-7b升高约1.5倍(P<0.01)。
7.人肝癌Huh-7、Hep3B细胞中miRNAlet-7b对Bcl-xl靶向调控作用
通过生物信息学预测靶基因、双荧光素酶报告基因检测实验、QPCR和Westernblot实验，结果显示miRNAlet-7b既可以在转录水平调控Bcl-xl靶基因，也可在翻译水平调控靶蛋白表达(P<0.05)。
8.过表达的miRNAlet-7b能抑制人肝癌Huh-7、Hep3B细胞增殖及抑制细胞周期进展
平板克隆形成实验、CCK-8法、EdU细胞增殖检测实验结果显示过表达的miRNAlet-7b能抑制人肝癌Huh-7、Hep3B细胞增殖(P<0.01)；PI单染细胞周期检测过表达的miRNAlet-7b能导致人肝癌Huh-7、Hep3B细胞生长周期阻滞，主要表现为G1期增加，S期减少(P<0.01)。
9.过表达的miRNAlet-7b能促进人肝癌Huh-7、Hep3B细胞凋亡
过表达miRNAlet-7b的肝癌Huh-7、Hep3B细胞株，DAPI染色后观察到胞内染色质固缩、凝聚、核碎裂等现象，细胞出现早期凋亡的典型特征；超微量ATP酶活力检测实验结果显示miRNAlet-7b的过表达导致肝癌Huh-7、Hep3B细胞的Na+k+-ATPase、Ca2+Mg2+-ATPase和Total-ATPase活力出现不同程度的下降，其中Na+k+-ATPase变化较为明显(P<0.01)；JC-1单染流式细胞术检测结果显示miRNAlet-7b的过表达导致肝癌Huh-7、Hep3B细胞的线粒体膜电位下降(P<0.01)；AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡实验进一步证实了miRNAlet-7b的过表达导致肝癌Huh-7、Hep3B细胞的凋亡率升高(P<0.01)。
10.过表达的miRNAlet-7b能抑制裸鼠皮下移植瘤(人肝癌Huh-7、Hep3B细胞)的生长(P<0.01)。移植瘤经过HE染色后,在显微镜下可见细胞形状大小不一，核大深染，核异型及病理分裂像明显,确定为恶性肿瘤组织。Westernblot实验和免疫组织化学法检测结果显示，过表达miRNAlet-7b的裸鼠皮下移植瘤中Bcl-xl蛋白表达明显减少(P<0.01)，而Bak蛋白表达水平提高(P<0.01)。
[结论]
1.低氘水具有抑制人肝癌Huh-7、Hep3B细胞增殖、迁移与侵袭，促进凋亡等生物效应，且随着氘浓度的减低，抑制效果越明显，但当氘浓度降到50ppm时，再降低氘浓度，抑制效果变化不大。此外，低氘水对人正常肝L-O2细胞无明显作用。
2.低氘水可调控凋亡相关蛋白Bcl-xl、Bak、Bcl-2、Phospho-Bcl-2(Thr56)、Phospho-Bcl-2(Ser70)、Bax、PARP、CleavedPARP、CleavedCaspase-3的表达，抑制人肝癌Huh-7、Hep3B细胞增殖，促进其凋亡。
3.低氘水具有抑制裸鼠皮下移植瘤(人肝癌Huh-7、Hep3B细胞)生长的作用，并且不影响裸鼠的体重和生活状态，其抑癌机制可能是通过调控凋亡相关蛋白Bcl-xl及Bak的表达。
4.低氘水能诱导人肝癌Huh-7、Hep3B细胞中miRNAlet-7b的表达。与人正常肝L-O2细胞相比，miRNAlet-7b在人肝癌Huh-7、Hep3B细胞中呈低表达。
5.在人肝癌Huh-7、Hep3B细胞中过表达的miRNAlet-7b既可以在转录水平调控Bcl-xl靶基因，也可在翻译水平调控靶蛋白表达。
6.过表达的miRNAlet-7b能抑制人肝癌Huh-7、Hep3B细胞增殖，导致细胞周期阻滞以及促进细胞凋亡等生物效应。
7.过表达的miRNAlet-7b可抑制裸鼠皮下移植瘤(人肝癌Huh-7、Hep3B细胞)的生长发展，其抑癌机制可能是通过调控凋亡相关蛋白Bcl-xl及Bak的表达。