【摘 要】
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研究背景与目的:实验室前期已经报道Apelin-13/APJ系统可通过多种途径诱导心肌细胞肥大,但详细的机制仍需进一步探究。钙超载是心肌肥大的起始环节,高尔基体作为细胞内稳定的钙库,对维持钙稳态起着关键作用。分泌途径Ca2+-ATP酶(secretory granules Ca2+-ATPases,SPCA1)负责将胞质中的钙离子转运至高尔基体中。泛素折叠修饰(ubiquitin-fold mod
【基金项目】
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国家自然科学基金(No.81973326); 湖南省自然科学基金(No.2019JJ40255、2021JJ40939);
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研究背景与目的:实验室前期已经报道Apelin-13/APJ系统可通过多种途径诱导心肌细胞肥大,但详细的机制仍需进一步探究。钙超载是心肌肥大的起始环节,高尔基体作为细胞内稳定的钙库,对维持钙稳态起着关键作用。分泌途径Ca2+-ATP酶(secretory granules Ca2+-ATPases,SPCA1)负责将胞质中的钙离子转运至高尔基体中。泛素折叠修饰(ubiquitin-fold modifier,UFM1)参与各种生物学过程,包括G蛋白偶联受体成熟。血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白(angiotensinⅡreceptor-like protein J,APJ)是一种G蛋白偶联受体。本课题将明确Apelin-13能否促进心肌细胞UFM1类泛素化修饰SPCA1,诱导高尔基体Ca2+超载,并再此基础上进一步阐明UFM1类泛素化修饰SPCA1促高尔基体Ca2+超载能否调控Apelin-13/APJ系统促心肌细胞肥大。以期Apelin-13/APJ系统成为治疗心肌细胞肥大的新靶点提供新的理论依据和实验基础。方法:1.Western Blot测定H9c2大鼠心肌细胞中UFM1、SPCA1、ANP和BNP的表达;2.构建siRNA-UFM1干扰质粒和siRNA-SPCA1干扰质粒沉默H9c2大鼠心肌细胞中UFM1、SPCA1蛋白表达;3.荧光分光光度法检测H9c2大鼠心肌细胞中高尔基体Ca2+浓度;4.免疫荧光技术观察H9c2大鼠心肌细胞中UFM1和SPCA1共定位;5.免疫荧光技术观察H9c2大鼠心肌细胞的骨架大小;6.ScepterTM手持细胞计数仪测量H9c2大鼠心肌细胞的直径和体积大小;结果:1.Apelin-13呈浓度和时间依赖性上调H9c2大鼠心肌细胞中高尔基体Ca2+浓度;2.Apelin-13呈浓度和时间依赖性促进H9c2大鼠心肌细胞中UFM1、SPCA1、ANP和BNP表达;3.siRNA-SPCA1和siRNA-UFM1均抑制Apelin-13诱导的H9c2大鼠心肌细胞中高尔基体Ca2+浓度上调;4.siRNA-SPCA1和siRNA-UFM1均抑制Apelin-13诱导的H9c2大鼠心肌细胞中SPCA1、ANP、BNP的表达;5.Apelin-13诱导H9c2大鼠心肌细胞中UFM1与SPCA1共定位,siRNA-SPCA1和siRNA-UFM1均抑制Apelin-13诱导的H9c2大鼠心肌细胞中UFM1和SPCA1的共定位;6.siRNA-SPCA1和siRNA-UFM1均抑制Apelin-13诱导H9c2大鼠心肌细胞肥大结论:UFM1类泛素化修饰SPCA1促高尔基体Ca2+超载参与Apelin-13/APJ系统促心肌细胞肥大;
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