m6A修饰识别蛋白与系统性红斑狼疮的关联性研究

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目的收集SLE患者和健康对照外周静脉血;提取PBMC在m RNA水平进行检测表达水平。分析m6A修饰识别蛋白在SLE患者和健康对照中水平差异,并探讨其与SLE临床疾病状态、相关细胞分泌因子表达水平的关系,探讨其对SLE的疾病诊断价值。方法本研究采用病例对照研究设计,收集SLE患者和健康对照人群的外周静脉血,并在4小时内提取外周血样本中单核淋巴细胞和血浆样本进行分装。提取单核淋巴细胞中总RNA逆转录为c DNA文库,以实时荧光定量PCR实验检测参与m6A修饰识别蛋白的m RNA表达水平。依据差异表达的识别蛋白表达水平,结合文献,在SLE患者及健康对照群体血浆样本中进行ELISA实验检测特定细胞分泌因子表达水平。(1)分析研究SLE患者与健康对照之间m6A识别蛋白表达水平差异;(2)探讨SLE患者中,m6A识别蛋白表达水平与SLE患者相关临床疾病评价指标、疾病活动度等指标之间的关联性;(3)对于异常表达的m6A识别蛋白,进行与相关血浆分泌因子表达水平的关联性研究,为SLE患者发病机制以及相关的治疗提供一定的理论依据。结果(1)实时荧光定量PCR实验发现SLE患者和健康对照的参与m6A修饰的识别蛋白YTHDF1和HNRNPA2B1的m RNA表达水平存在差异,分别为Z=-2.221,P=0.026;Z=-2.427,P<0.001。其余识别蛋白表达水平在病例与健康对照组间差异未见统计学意义。对各组识别蛋白表达水平之间进行关联性分析发现,YTHDF1与YTHDF2、YTHDF3表达水平存在相关性;YTHDF2与YTHDC1、YTHDC2存在相关性;YTHDF3与YTHDC2、HNRNPA2B1存在相关性;YTHDC2与HNRNPA2B1之间也存在相关性。(2)YTHDF1表达水平与关节炎、低补体、凝血酶原时间相关,YTHDF2与免疫蛋白Ig G、Ig M、风湿指标血沉(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、抗链球菌溶血素(anti-streptolysin,ASO)水平、CD8绝对数相关;YTHDC1与免疫蛋白Ig M和风湿指标血沉(ESR)呈正相关;YTHDF3与国际标注率(INR)、纤维蛋白原(FIB)呈正相关;识别蛋白与SLE患者部分临床生化指标水平分析存在相关性。识别蛋白HNRNPA2B1作为SLE疾病诊断的潜在生物标志物,其AUC为0.790(95%CI:0.704~0.876)。(3)细胞分泌因子IL-2、IFN-a以及IP-10的表达水平在病例与健康对照组中差异分析发现,仅IP-10在病例与对照间差异具有统计学意义。按照临床疾病活动度相关的临床表现分型进行分组后,比较两组间各细胞因子表达水平差异时均未发现差异具有显著性意义。血浆因子IFN-a表达水平在SLE病例的抗核糖核蛋白抗体阳性组与阴性组之间存在差异,并具有统计学意义。细胞因子IL-2与SLE患者抗核小体抗体(anti-nucleosome antibodies,Anu A)阳性、免疫蛋白Ig A表达水平具有相关性。细胞因子IP-10与风湿指标超敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs CRP)呈正相关。(4)细胞因子IFN-a表达水平与m6A修饰识别蛋白YTHDF1表达水平具有正相关(rs=0.337,P=0.048),细胞趋化因子IP-10表达水平与m6A修饰识别蛋白YTHDF1表达水平具有负相关(rs=-0.307,P=0.048);细胞因子IL-2表达水平与m6A修饰识别蛋白YTHDF3表达水平呈正相关(rs=0.443,P=0.007)。细胞因子IP-10与m6A修饰识别蛋白YTHDF3表达水平呈负相关(rs=-0.442,P=0.003)。结论(1)SLE患者PBMC的m RNA表达水平检测上有,m6A修饰识别蛋白YTHDF1表达水平在SLE中较健康对照组低,HNRNPA2B1表达水平在SLE中较健康对照组高,差异具有统计学意义。(2)m6A修饰识别蛋白和SLE某些临床表现以及临床检查指标具有相关性。m6A识别蛋白HNRNPA2B1对于SLE疾病的诊断价值较高,可作为SLE疾病潜在的生物标志物。(3)部分m6A修饰识别蛋白与参与自身免疫性疾病免疫调节有关因子IL-2、IFN-a以及IP-10表达水平的关联性存在统计学差异,其对于免疫调节的参与机制的研究有待进一步探究。
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