【摘 要】
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目的:（1）明确AQP8在小鼠肠道组织的表达定位（1）明确AQP8在炎症性肠病中的表达特征（2）分析AQP8敲除对小鼠炎症性肠病发生发展的影响方法:（1）对AQP8-GFP转基因小鼠的肠道组织进行冰冻切片,通过绿色荧光蛋白（GFP）荧光示踪明确AQP8在小鼠肠道内定位。（2）利用AQP8-GFP转基因小鼠,给予3.5%DSS溶液诱导建立小鼠炎症性肠病模型并评价模型。（3）通过绿色荧光蛋白（GFP）
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目的:（1）明确AQP8在小鼠肠道组织的表达定位（1）明确AQP8在炎症性肠病中的表达特征（2）分析AQP8敲除对小鼠炎症性肠病发生发展的影响方法:（1）对AQP8-GFP转基因小鼠的肠道组织进行冰冻切片,通过绿色荧光蛋白（GFP）荧光示踪明确AQP8在小鼠肠道内定位。（2）利用AQP8-GFP转基因小鼠,给予3.5%DSS溶液诱导建立小鼠炎症性肠病模型并评价模型。（3）通过绿色荧光蛋白（GFP）荧光示踪分析AQP8在小鼠炎症性肠病中的表达及定位情况。（4）利用AQP8敲除小鼠和野生型小鼠尾部组织,抽取其DNA对小鼠基因型进行鉴定。（5）利用AQP8敲除小鼠和野生型小鼠,饮用3.5%DSS溶液诱导建立炎症性肠病模型并评价肠道的炎症性损伤情况。（6）利用苏木精伊红染色评估炎症性肠病小鼠的结肠组织病理学变化,比较AQP8敲除型小鼠和野生型结肠炎症损伤程度。（7）利用免疫印记法分析炎症性肠病小鼠结肠组织的炎症相关蛋白NF-κBp65、Nrf2的表达情况,评估AQP8敲除小鼠和野生型小鼠的炎症反应,评估AQP8敲除对疾病的影响,探究AQP8与炎症性肠病的关联性。结果:（1）通过绿色荧光蛋白（GFP）示踪AQP8-GFP转基因小鼠肠道AQP8的表达定位,结果显示AQP8主要分布于小鼠盲肠、横结肠、升结肠、降结肠、乙状结肠、直肠的吸收上皮细胞顶质膜。（2）评估AQP8-GFP转基因小鼠炎症性肠病模型,与空白组相比,模型组小鼠出现皮毛无光泽、进食及活动减少、体重显著减轻、肉眼血便等炎症性肠病症状,疾病活动指数增加、结肠长度缩短,确认炎症性肠病造模成功。（3）AQP8-GFP转基因小鼠炎症性肠病造模之后,AQP8表达明显下调,蛋白表达量降低约59%,表达位置由吸收上皮细胞顶质膜转向细胞胞浆内。（4）对AQP8敲除小鼠和野生型小鼠剪尾提取尾部DNA进行基因鉴定,确认小鼠品系以及基因型正确。（5）通过评估AQP8敲除小鼠和野生型小鼠炎症性肠病造模后的整体状态、体重下降率、疾病活动指数、结肠指数,AQP8敲除小鼠炎症性肠病体重变化率、疾病活动指数显著低于野生型小鼠,AQP8敲除小鼠结肠指数显著高于野生型小鼠,两组间差异具有统计学意义（P＜0.05）。（6）分析AQP8敲除小鼠和野生型小鼠远端结肠组织的苏木精伊红染色（HE）结果,AQP8敲除小鼠组织病理学评分显著低于野生型小鼠,两组间差异具有统计学意义（P＜0.01）。（7）免疫印记结果显示AQP8敲除小鼠远端结肠组织的NF-κB p65、Nrf2蛋白表达显著低于野生型小鼠,两组间差异具有统计学意义（P＜0.001）。结论:（1）利用AQP8-GFP基因敲入小鼠证实了AQP8主要在在小鼠盲肠、横结肠、升结肠、降结肠、乙状结肠以及直肠的吸收上皮细胞顶质膜表达,为AQP8参与肠道功能提供了理论证据。（2）在3.5%DSS饮用水诱导炎症性肠病模型中,AQP8敲除小鼠的病变程度显著轻于野生型小鼠,提示AQP8促进炎症性肠病的发展,在炎症性肠病的病理机制中发挥重要作用,可能成为炎性肠病治疗的新靶标。（3）AQP8敲除能抵御炎症性肠病的病理发展,推测可能与其H2O2转运功能参与结肠上皮氧化应激调控有关。
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