【摘 要】
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IGF2BP1是影响畜禽经济性状的重要候选基因,广泛参与动物胚胎发育、细胞增殖分化等生物学过程。实验室前期的山羊重测序结果显示,IGF2BP1基因区域受到强烈选择,且在第二内含子发现多个SNP位点,其中有7个SNP位点位于保守区域,但其与体重和体尺关系尚不清楚,此外这些位点的功能也有待进一步明确。因此,本研究选取IGF2BP1第二内含子7个保守区域的SNP位点为研究对象,以348只南江黄羊（母羊2
【基金项目】
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国家自然科学基金青年基金项目,NamiRNA-193b-3p靶向IGF2BP1调控山羊骨骼肌卫星细胞增殖分化的分子机制,项目编号:31802048； 四川省自然科学基金面上项目； 2021年度四川省留学回国人员科技活动项目；
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IGF2BP1是影响畜禽经济性状的重要候选基因,广泛参与动物胚胎发育、细胞增殖分化等生物学过程。实验室前期的山羊重测序结果显示,IGF2BP1基因区域受到强烈选择,且在第二内含子发现多个SNP位点,其中有7个SNP位点位于保守区域,但其与体重和体尺关系尚不清楚,此外这些位点的功能也有待进一步明确。因此,本研究选取IGF2BP1第二内含子7个保守区域的SNP位点为研究对象,以348只南江黄羊（母羊217只,公羊131只）为试验群体,采用Sanger测序法对其进行验证,然后再利用飞行时间质谱方法对其进行基因型分型,分型结果采用Haploview 4.2进行连锁不平衡分析,使用SAS 9.4软件GLM程序以出生年份、出生月份、性别、场和基因型效应作为固定效应建立模型进行关联分析,再利用PGL4.23载体构建重组质粒进行双荧光素酶报告实验。主要获得了以下结果:1.Sanger测序验证重测序结果显示,7个SNP位点在南江黄羊群体中存在,SNP具体信息为rs656779265（G＞A）、rs638185407（T＞A）、rs665251622（A＞C）、rs640683953（A＞C）、rs654358008（G＞C）、rs671132057（T＞C）、rs652062749（G＞A）。2.群体遗传参数分析结果表明,7个SNP位点都具有多态性,且均符合哈代-温伯格平衡（P＞0.05）,其中4个SNP位点rs656779265（G＞A）、rs665251622（A＞C）、rs671132057（T＞C）、rs652062749（G＞A）具有中度多态性（0.25＜PIC≤0.5）,3个SNP位点rs638185407（T＞A）、rs640683953（A＞C）、rs654358008（G＞C）具有低度多态性（PIC≤0.25）。3.南江黄羊体重和体尺关联分析结果证实,6个SNP位点与体重和体尺性状显著相关。其中,rs671132057（T＞C）和rs654358008（G＞C）与初生重显著相关（P＜0.05）,rs654358008（G＞C）和rs652062749（G＞A）与后期（6月龄、周岁和1.5岁）南江黄羊体重和体尺性状显著相关（P＜0.05）。4.连锁不平衡分析显示,rs638185407（T＞A）、rs665251622（A＞C）和rs671132057（T＞C）三个位点属于强连锁关系,然后对三个强连锁位点进行组合基因型关联分析,其中,ATCACT组合基因型初生重显著优于其他组合基因型（P＜0.05）,TTAACT组合基因型在二月龄、六月龄、周岁和1.5岁的体重和体尺显著优于其它组合基因型（P＜0.05）,TTCCCC组合基因型在四月龄体重和体尺显著优于其它组合基因型（P＜0.05）。5.7个SNPs的转录结合因子预测结果显示,7个SNP位点突变前后均能导致转录因子结合位点的改变。对其中三个具有强连锁的位点进行细胞水平验证,结果表明,rs638185407（T＞A）位点所在的480bp区域能增强萤光素酶活性,且突变型（AA）荧光素酶活性在Hela细胞高于野生型（TT）。综上所述,南江黄羊IGF2BP1基因第二内含子6个SNP位点可作为南江黄羊体重和体尺选择的分子标记。其中,ATCACT、TTAACT和TTCCCC组合基因型可作为联合育种分子标记参考。初步验证rs638185407（T＞A）位点所在区域具有顺式调控元件作用,且突变纯合基因型（AA）的激活作用相对野生型纯合基因型（TT）稍强。
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