【摘 要】
：
食源性致病菌威胁人类健康和公共卫生,食用被其污染的食物,可引起以感染、中毒为代表的多种食源性疾病。高效严谨的检验检疫手段,对于食源性致病菌危害的控制极其重要。食源性致病菌可用的检测方法有生化鉴定法、酶联免疫法、PCR法和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法等,这些方法各有优缺点,其中作为国标法常用的生化鉴定法具有操作繁琐、耗时长、可靠性和准确性差等缺点。我们提出了一种检测致病菌新策略,该策略将食源性
论文部分内容阅读
食源性致病菌威胁人类健康和公共卫生,食用被其污染的食物,可引起以感染、中毒为代表的多种食源性疾病。高效严谨的检验检疫手段,对于食源性致病菌危害的控制极其重要。食源性致病菌可用的检测方法有生化鉴定法、酶联免疫法、PCR法和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法等,这些方法各有优缺点,其中作为国标法常用的生化鉴定法具有操作繁琐、耗时长、可靠性和准确性差等缺点。我们提出了一种检测致病菌新策略,该策略将食源性致病菌的检测转化为对其特征肽的检测,而特征肽可以通过液相色谱-串联质谱联用（LC-MS/MS）技术实现靶向的高可靠性的精准分析。基于该策略,本研究致力于建立食源性致病菌基于特征肽的检测方法。该方法成功实施的关键的是,针对特定致病菌寻找到可靠的、特异性的组合特征肽。金黄色葡萄球菌和阪崎肠杆菌等是食品检验中典型的致病菌,常见于奶制品中。本研究针对金黄色葡萄球菌和阪崎肠杆菌的检测,分别挖掘和初筛了候选特征肽,建立了候选特诊肽基于LC-MS/MS的靶向分析方法,然后通过生物信息学考察和实验验证等手段筛选确定了合适的组合特征肽,最终依靠组合特征肽实现了痕量致病菌在奶制品中的检出。首选建立了基于特征肽检测牛奶中金黄色葡萄球菌的方法。针对金黄色葡萄球菌的九种候选特征肽,编号为S.I1～S.I9,以及金黄色葡萄球菌肠毒素的2种候选特征肽,编号为se A,se B,分别通过生物信息学分析和实验验证两个方面对其特异性进行了考察和评估。生物信息学分析利用Uniprot蛋白质数据库进行BLAST检索,发现S.I5对金黄色葡萄球菌的特异性相对较低。收集16株金黄色葡萄球菌和同属葡萄菌的其他菌株进行候选特征肽的实验验证分析,发现S.I8、S.I9和S.I5的特异性较差,不适合作为特征肽使用,而其他候选特征肽中检出其中任何三种特征肽,即可确认金黄色葡萄球阳性。最终选用S.I1,S.I2,S.I3,S.I4,S.I6,S.I7,se A,se B作为组合特征肽,并成功检测出奶粉样品中的100 CFU/m L的金黄色葡萄球菌,证明了该方法检测金黄色葡萄球菌及其肠毒素的可行性。其次建立了基于特征肽检测牛奶中阪崎肠杆菌的方法。本研究通过多株阪崎肠杆菌和非阪崎肠杆菌的蛋白质组学比较分析,并结合生物信息学分析方法,挖掘获得9条候选特征肽段。通过实验验证考察了这些候选特征肽的可靠性,最终筛选了4条肽作为阪崎肠杆菌特征肽,编号为C.I1～C.I4。通过在奶制品中添加不同浓度的阪崎肠杆菌,考察菌液浓度与特征肽LC-MS/MS响应的线性关系,发现C.I4与菌浓度呈相对较好的线性关系。依靠所筛选的特征肽,在增菌10 h条件下,通过基于LC-MS/MS的靶向分析实现了奶制品中极微量阪崎肠杆菌添加的灵敏检测。最后通过在奶粉中添加的极低浓度的产肠毒素金黄色葡萄球菌（100 CFU/m L）和阪崎肠杆菌（100 CFU/m L）,验证了通过混合特征肽同时检测两种致病菌的效果。结果证明,基于特征肽可以成功通过一次检测实现奶制品中两种致病菌金黄色葡萄球菌和阪崎肠杆菌的共检测,显示了通过特征肽方法高通量检测多种食源性致病菌的可行性。综上所述,我们的探索性工作证明了基于特征肽检测食源性致病菌的可行性,为将来开发和应用新的食源性致病菌建立重要的基础。基于特征肽的食源性致病菌检测新方法,对于提高相关食品检验的效率和质量具有重要意义。
其他文献
虾青素是具有抗氧化、抗炎及免疫调节功能的一种类胡萝卜素,广泛分布在自然界中,在食品、医疗、及化妆品行业具有很大的发展前景及应用需求。大肠杆菌作为一类结构简单且易于操作的原核生物,可作为虾青素异源表达的宿主。目前虾青素的异源改造工程基本是对β-胡萝卜素酮基化酶（CrtW）和β-胡萝卜素羟基化酶（CrtZ）两个合成酶进行筛选,从而实现虾青素合成途径的优化。虾青素作为一类疏水性萜类化合物,通常在膜组分中
苹果酸是一种四碳二元羧酸,可以广泛应用于食品、医疗、化工、保健等多个领域。由于黑曲霉具有低p H耐受性、碳源利用多样性、遗传背景清晰、发酵工艺成熟等特点,近年来以黑曲霉作为细胞工厂生产L-苹果酸获得了广泛关注。研究表明,苹果酸的高效转运外泌过程是影响苹果酸发酵水平的重要一环。但由于目前缺乏对黑曲霉内四碳二元羧酸转运系统的研究,苹果酸高产菌株的构建受到了一定的限制。因此,研究黑曲霉内四碳二元羧酸转运
癌症作为一种严重危害人类生命健康的主要因素是目前直接导致人类死亡的重要疾病,近年来靶向治疗手段在癌症的治疗中发挥着重要作用。CLK2（CDC-Like-kinase2）蛋白激酶是一类双特异性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,它的失调与很多癌症的发生、进展有关,是肿瘤靶向治疗的重要靶点。本课题以CLK2蛋白激酶为研究目标,建立了CLK2在原核细胞中的表达系统,搭建了CLK2蛋白激酶活性测试平台用来筛选44个嘌
雨生红球藻（Haematococcus Pluvialis）是天然虾青素的最佳来源,生产中主要使用两步培养法,首先提高培养密度获取大量生物质,然后利用胁迫环境诱导生物质积累虾青素,其中外源物质对藻生物量的获取和虾青素的积累都具有重要影响。本文探讨利用外源物质提高雨生红球藻培养密度和提升虾青素积累的方法,主要研究如下:（1）研究乙酸钠、pH值、接种量等因素对雨生红球藻培养的影响;对发酵工艺的培养时间
硝酸盐NO3--N是一种在工业废水和生活污水中均广泛存在的氮污染物,水体中NO3--N含量超标,对环境和人体健康都会造成很大伤害。Zn是一种广泛应用的重金属,大范围存在于含氮废水中,养殖、冶炼、化肥等多种工业都有涉及。但当前,有关Zn（Ⅱ）如何影响好氧反硝化过程中微生物细胞的代谢过程以及相关功能基因表达情况的研究还较少,因此,本课题筛选一株好氧反硝化菌,经鉴定为不动杆菌Acinetobacter,
随着流感病毒的抗原漂移和耐药株的出现,疫苗及部分药物的有效性在不断降低,寻找新型抗流感病毒的活性物质成为亟待解决的问题。受到机体阻碍病原体入侵宿主细胞的天然物理屏障启发,作为粘蛋白模拟物的抗流感病毒仿生药物设计成为目前研究的热门领域。本课题拟使用人血清白蛋白为骨架,将唾液酸衍生物作为其表面糖基修饰物,制备具有抗流感病毒作用的新型天然粘蛋白类似物。采用三氯甲基硅烷/氯化铋反应体系提高单体唾液酸C-2
啤酒作为世界上仅次于水和茶的第三大消费饮料,广受大众的喜爱和认可。众所周知,一款好的啤酒,在口感、色泽、香气上都有着很好的体验,因此,若想获得一款高品质的啤酒,提高市场竞争力,要从原料开始保证啤酒生产酿造的每一步都有严格的控制。基于啤酒风味物质调控对于提升啤酒品质具有重要的理论意义,本论文在啤酒酵母TCCC 31194的基础上,构建了ARO9基因过表达酵母菌株TCCC 31194::ARO9（S.
肉桂酯类化合物大多都作为香料化合物,在化妆品和食品工业都具有广泛的应用并且还可以作为很多重要功能化合物的合成前体。然而,目前这类化合物的合成方法大多是从植物提取或化学合成,但植物提取成本高、效率低,化学合成会用到危险化合物并涉及高温高压等苛刻反应条件。随着科学技术的进步,社会的不断发展,研究的焦点向更低能耗、更低污染、更安全的生产方式转变。微生物发酵法,相对于污染严重、高温高压条件的化学合成来讲,
磷脂酶B（PLB）能够特异性水解磷脂的sn-1和sn-2位酯键,可应用于水解磷脂酰胆碱（PC）合成甘油磷脂酰胆碱（L-alpha-glycerylphosphorylcholine,GPC）。GPC可以为乙酰胆碱的合成提供胆碱,除此之外,GPC还具有治疗脑部疾病、合成生长激素等生理功能,被广泛应用于食品、医药和化妆品行业。天然GPC的含量较少,难以通过提取获得。由于底物和催化剂具有毒性,化学合成法