【摘 要】
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目的:为了明确化积健脾汤对非酒精性脂肪肝（Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）的治疗效果,本课题从体内实验和体外实验研究其对NAFLD脂质聚积及氧化应激的调控作用及作用机制,为在临床中使用传统中药防治NAFLD提供了基础的试验证据。方法:1.在体内实验部分,首先通过高脂饮食诱导构建NAFLD的小鼠动物模型,将符合模型要求的小鼠分为5组,具体为:模型空白组
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目的:为了明确化积健脾汤对非酒精性脂肪肝（Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）的治疗效果,本课题从体内实验和体外实验研究其对NAFLD脂质聚积及氧化应激的调控作用及作用机制,为在临床中使用传统中药防治NAFLD提供了基础的试验证据。方法:1.在体内实验部分,首先通过高脂饮食诱导构建NAFLD的小鼠动物模型,将符合模型要求的小鼠分为5组,具体为:模型空白组、阳性对照组、化积健脾汤高、中、低剂量组;随后给予各组小鼠6周的药物干预,其中阳性对照组采用二甲双胍治疗,中药治疗组则分别使用高、中、低浓度的化积健脾汤进行治疗,其余组小鼠的灌胃物为蒸馏水;最后比较各组小鼠的体重、腰围及Lee’s指数变化;通过GTT和ITT来对各组小鼠葡萄糖耐量异常（IGT）和胰岛素抵抗（IR）的情况进行检测;解剖后称量肝脏组织湿重并计算其脏器系数;用全自动生化分析仪检测各组小鼠肝功能酶及血脂的改变;油红O染色法观察分析各组小鼠肝脏脂质聚集的情况;HE染色法观察各组小鼠肝脏组织的形态结构变化情况;用ELISA方法对各组小鼠的ROS、SOD、MDA的表达水平进行检测;采用RT-q PCR法对肝脏组织中AMPK、Nrf2和HO-1 m RNA的相对表达量的变化进行检测;通过免疫组化和蛋白印迹法检测p-AMPK及抗氧化反应（Nrf2/HO-1）关键信号分子蛋白表达水平。2.在体外实验部分,首先购买SD大鼠30只,体质量约200 g,随机分为正常组10只和含药血清组20只。其中正常组应用生理盐水灌胃,含药血清组应用中药化积健脾汤灌胃,每日一次,连续7天后取各组大鼠血清,保存于-80℃冰箱;其次将培养的HepG2细胞分为正常组、模型组和含药血清干预组。其中正常组应用含有正常血清的培养基培养,模型组应用含有正常血清培养基培养并以游离脂肪酸诱导,含药血清干预组应用有含药血清培养基培养并以游离脂肪酸诱导;最后通过油红O染色观察肝细胞脂滴沉积情况。应用酶标仪检测TC、TG含量。用RT-q PCR法检测肝细胞中AMPK、Nrf2和HO-1m RNA的相对表达水平;通过蛋白印迹法检测检测p-AMPK及抗氧化反应（Nrf2/HO-1）关键信号分子蛋白表达水平。结果:1.在化积健脾汤治疗6周后,相对于模型对照组,各给药组小鼠肝脏脂肪变性的水平显著降低;血清中TC、TG水平明显下降;肝脏组织中ROS、MDA水平明显降低;SOD含量显著上调;肝脏组织中AMPK、Nrf2、HO-1 m RNA表达量及蛋白表达量明显升高（P＜0.05）。2.经过含药血清干预后,与模型组相比,含药血清组细胞内脂滴显著减少,TC、TG水平显著降低。信号通路中关键信号分子AMPK、Nrf2/HO-1m RNA和蛋白表达量明显升高（P＜0.05）。结论:化积健脾汤可参与机体对NAFLD的脂质聚积和氧化应激的调控,并可通过激活AMPK,上调Nrf2/HO-1信号通路抑制氧化应激,达到对NAFLD的保护作用。
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