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目的:草甘膦是世界范围内使用最广泛的除草剂。近年来的多项研究表明,草甘膦暴露与雄性生殖器官发育异常和精子质量等生殖功能降低有关,睾酮分泌的抑制可能是草甘膦导致雄性生殖功能障碍的重要诱因之一。然而,草甘膦诱导睾酮合成分泌紊乱的分子机制尚不清楚。本学位论文以小鼠睾丸间质细胞TM3作为研究对象,分析草甘膦暴露对睾酮合成分泌的影响,并探索内质网应激和下游的PERK/eIF2α信号通路在这一过程中的作用。方法:(1)TM3细胞暴露于0.01～2000 mg/L的草甘膦中24 h后,采用CCK8法检测不同浓度的草甘膦暴露对TM3细胞活力的影响;提取细胞培养液并通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测草甘膦暴露对睾酮分泌的影响;(2)TM3细胞经5 mg/L的草甘膦分别染毒1 h、3 h、6 h、12 h和24 h后,提取细胞蛋白,通过蛋白免疫印迹技术检测分析草甘膦暴露对类固醇激素合成酶和内质网应激以及PERK/eIF2α信号通路相关蛋白表达及活化水平的影响;(3)为分析内质网应激在草甘膦诱导的睾酮合成分泌紊乱中的作用,TM3细胞经内质网应激抑制剂PBA预处理后,暴露于5 mg/L的草甘膦中24 h,通过蛋白免疫印迹技术和免疫荧光技术分析类固醇激素合成酶St AR和CYP17A1蛋白的表达水平,通过ELISA法检测睾酮的含量;(4)为进一步分析PERK/eIF2α信号通路在草甘膦诱导的睾酮合成分泌紊乱中的作用,用PERK激酶抑制剂GSK2606414预处理TM3细胞后,再将之暴露于5 mg/L的草甘膦中24 h,通过蛋白免疫印迹技术和免疫荧光技术分析St AR和CYP17A1蛋白的表达水平,并通过ELISA法检测睾酮的含量。结果:(1)与假暴露组相比,200 mg/L以下浓度的草甘膦暴露对TM3细胞活力无显著影响,但0.5 mg/L及以上浓度的草甘膦暴露后,细胞培养液中的睾酮含量显著下降;(2)5 mg/L的草甘膦暴露后,类固醇激素合成酶St AR和CYP17A1的表达水平显著下降,CYP11A1和3β-HSD则不受影响;内质网应激的标志性分子Bip的蛋白表达水平上升,PERK和eIF2α的磷酸化水平升高,假暴露组和暴露组间的差异均具有统计学意义;(3)用内质网应激抑制剂PBA预处理TM3细胞后,与草甘膦单独暴露组相比,PBA预处理组Bip、p-PERK和p-eIF2α蛋白水平显著下降,同时St AR和CYP17A1的蛋白水平以及分泌的睾酮含量都显著上升;(4)用PERK抑制剂GSK2606414预处理TM3细胞后,与草甘膦单独暴露组相比,GSK2606414预处理组PERK和eIF2α的磷酸化水平都显著下调,同时St AR和CYP17A1的蛋白水平以及分泌的睾酮含量都显著上升。结论:基于本研究所获得的实验结果,我们得出以下结论:(1)0.5 mg/L以上的草甘膦暴露能抑制TM3细胞睾酮的分泌,该效应与类固醇激素合成酶St AR和CYP17A1的表达水平下调有关;(2)草甘膦能诱导TM3细胞发生内质网应激并激活下游的PERK/eIF2α信号通路;(3)草甘膦诱导的TM3细胞睾酮合成分泌紊乱依赖于内质网应激介导的PERK/eIF2α信号通路的活化。