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脑胶质瘤(Glioma)是最为常见的中枢神经系统原发恶性肿瘤,其中胶质母细胞瘤(Glioblastoma,GBM,WHOⅣ级)恶性程度最高,具有高复发、高侵袭、高死亡率等特点,约占胶质瘤发病总数一半左右,即使给予积极综合治疗后,5年生存率仍低于10%。近年来,研究发现指出上皮-间质转化(Epithelial to mesenchymel transition,EMT)的肿瘤细胞呈现高度迁移性和高侵袭性,与肿瘤的转移、侵袭和复发等恶性生物学行为有着密切的联系。已有学者研究发现,胶质瘤细胞能发生EMT,这种机制有可能在胶质瘤的恶性生物学行为及对常规治疗的抵抗中起着举足轻重的作用。TGF-β/Smad信号通路是EMT的经典信号通路,转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)是一种拥有多种生物学活性重要的生物因子,有证据表明TGF-β1可参与诱导肿瘤细胞发生EMT。长链非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)是一类拥有重要生物学功能的RNA,诸多研究证明LncRNA可以在肿瘤发生、发展起到重要调节作用。小核仁RNA宿主基因7(Small nucleolar RNA host gene 7,SNHG7)是一种在恶性肿瘤中起到重要作用的新型LncRNA,研究表明相比于非肿瘤性脑组织,SNHG7在GBM标本中过表达的。既往研究指出,SNHG7可以通过EMT在肝癌、骨肉瘤、前列腺癌、乳腺癌等多发肿瘤的增殖、迁移及侵袭起重要调控作用,与患者不良预后密切相关,但SNHG7是否可通过EMT在胶质瘤中调控其增殖、迁移及侵袭等国内外尚未见报道。[目 的]1.初步探究沉默SNHG7调控U251人脑胶质瘤细胞EMT过程中的影响。2.观察沉默SNHG7对U251人脑胶质瘤细胞EMT后侵袭、迁移及增殖能力的影响,旨在为胶质瘤的诊疗、预后寻找一种新的治疗方式。[方 法]1.将U251人脑胶质瘤细胞和HMO6细胞进行培养,通过RT-PCR检测SNHG7相对表达量。2.将U251人脑胶质瘤细胞分为对照组(si-NC)和实验组(SNHG7 si-RNA1,2,3),对上述四组细胞培养48小时后,RT-PCR检测SNHG7的表达水平,对比NC组筛选出干扰效率最佳的SNHG7 siRNA备后续实验。3.将U251人脑胶质瘤细胞细胞分为两组,其中一组加入TGF-β1(浓度为1Ong/mL),上述两组细胞在培养48h,72h后,Transwell实验分别检测细胞穿过基质膜数量,鉴定其侵袭能力,筛选出TGF-β1最佳作用时间备后续实验。4.将细胞分为对照组(U251人脑胶质瘤细胞+si-NC)、EMT组(U251人脑胶质瘤细胞+si-NC+TGF-β1)、SNHG7基因沉默组(U251胶质瘤细胞+SNHG7 si-RNA+TGF-β1)三组细胞进行培养,培养至对数生长期,依次应用CCK-8法检测上述三组细胞增殖活力的情况;Wound healing实验检测细胞迁移能力;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;Western blot实验检测上皮及间质标志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及MMP-9的蛋白表达水平。[结 果]1.RT-PCR检测SNHG7的表达水平:U251细胞SNHG7相对表达量远高于HMO6(P<0.001);2.RT-PCR实验检测:与si-NC组相比,三组SNHG7si-RNA均能抑制U251细胞的SNHG7表达水平(P<0.05)。与其他两组si-RNA相比,SNHG7si-RNA3抑制效果最为显著(P<0.05),其他两组抑制效果无显著差异(P>0.05);3.Transwell检测细胞侵袭结果可见,对比48h时的U251细胞+TGF-β1组与U251细胞组的穿过基质膜的细胞数量,72h时U251细胞+TGF-β1组穿过的细胞数量更多(P<0.05),说明此时该细胞组侵袭能力更强。因此,选择72h为TGF-β1最佳作用时段;4.CCK-8实验检测结果提示,与si-NC组相比,EMT组U251细胞细胞活力增加(P<0.05);与EMT组相比,si-SNHG7组U251细胞细胞活力显著下降(P<0.05);5.Wound healing实验检测结果显示:与si-NC组相比,EMT组U251细胞划痕愈合面积较大(P<0.05);与EMT组相比,si-SNHG7组愈合面积较小(P<0.05);6.Transwell实验结果显示:与si-NC组相比,EMT组U251细胞组中侵袭细胞数量显著增多(P<0.05);与EMT组相比,si-SNHG7组侵袭细胞数量明显减少(P<0.05);7.Western blot实验检测结果显示:与si-NC组相比,EMT组U251细胞组中N-cadherin、Vimentin、MMP-9 表达水平升高,E-cadherin 表达水平降低(P<0.05);与 EMT 组相比,si-SNHG7 组 N-cadherin、Vimentin、MMP-9 表达水平降低,E-cadherin表达水平升高(P<0.05)。[结 论]本实验研究表明沉默LncRNA SNHG7可抑制U251人脑胶质瘤细胞EMT过程,并可以降低U251人脑胶质瘤细胞EMT后的增殖、侵袭及迁移能力。