第一部分替拉扎明在低氧环境下抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移目的:探索替拉扎明在常氧和低氧环境下对骨肉瘤细胞的作用。方法:使用三气培养箱模拟体内低氧环境,通过MTT、Transwell细胞迁移、细胞划痕实验探索替拉扎明对骨肉瘤细胞的影响,并与之在常氧下进行对比。结果:在低氧环境下替拉扎明作用后的143B、MNNG/HOS、U2OS三种细胞系在24 h的时间点均出现了明显的细胞活力下降,并且成剂量依赖性。替拉扎明可明显降低143B细胞克隆形成的能力,并且随着替拉扎明的浓度增加,细胞形成的克隆数减少更显著。低氧环境下迁移到下室的细胞逐渐减少,但是常氧下的细胞并未受到明显的影响。10μM替拉扎明处理过的143B细胞迁移能力在低氧环境下出现明显的降低,但是常氧下的细胞并未受到明显的抑制。结论:替拉扎明在低氧环境下对骨肉瘤细胞的增殖和迁移有抑制作用。第二部分替拉扎明通过铁死亡抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移目的:探索替拉扎明抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移的作用机制。方法:分别在常氧和低氧环境下,通过流式细胞术、荧光显微镜、多功能酶标仪等方法和仪器检测骨肉瘤细胞中的活性氧、Fe2+积累、脂质过氧化和铁死亡蛋白表达水平。结果:在低氧环境下随着替拉扎明药物浓度的增加,活性氧的数量逐渐递增,而常氧下的细胞无此现象。在低氧环境下MDA（Malondialdehyde,丙二醛）的含量随着替拉扎明浓度的增加而上升,并且明显高于常氧。10μM的替拉扎明在低氧环境下能明显增加Fe2+在细胞的积累。在低氧下,Western Blot实验检测到抑制肿瘤的p53蛋白表达增加,而抗氧化的SLC7A11、GPX4蛋白则明显下降。铁死亡抑制剂Fer-1能减弱替拉扎明在低氧环境下对骨肉瘤细胞增殖和脂质过氧化的影响。结论:替拉扎明在低氧环境下抗骨肉瘤的作用可能是通过铁死亡诱导来实现的。第三部分替拉扎明通过SLC7A11诱导铁死亡抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移目的:验证低氧环境下替拉扎明是否通过SLC7A11诱导铁死亡抑制骨肉瘤。方法:低氧环境下通过细胞克隆形成实验、Transwell细胞迁移实验、活性氧含量测定等方法,来比较共处理组、单纯过表达SLC7A11组和单纯替拉扎明组之间的差异。结果:本研究在低氧环境下通过10μM浓度的替拉扎明处理过表达SLC7A11的143B细胞24 h,使用细胞克隆形成实验验证替拉扎明对143B细胞增殖能力的影响。与单独替拉扎明组明显减少克隆形成相比,SLC7A11过表达联合替拉扎明则增加了克隆形成的数量,但是少于单独过表达SLC7A11组。低氧下过表达SLC7A11的细胞迁移到下室的数量明显增多,并且与替拉扎明共处理组的细胞数目显著多于单用替拉扎明组。替拉扎明明显增加活性氧的含量,但是过表达SLC7A11后,细胞的活性氧明显得到了恢复。结论:替拉扎明低氧环境下诱导骨肉瘤发生铁死亡的作用是通过抑制SLC7A11实现的。