【摘 要】
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目的通过分析颈淋巴结转移阳性的喉鳞状细胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC）样本与淋巴结样本中环状 RNA（circular RNA,circRNA）及信使 RNA（messenger RNA,mRNA）表达谱的变化,构建 circRNA-miRNA-mRNA网络,综合探讨circRNA在LSCC颈部淋巴结转移中的调控机制。方法1.选择颈淋巴结转移阳性
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目的通过分析颈淋巴结转移阳性的喉鳞状细胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC）样本与淋巴结样本中环状 RNA（circular RNA,circRNA）及信使 RNA（messenger RNA,mRNA）表达谱的变化,构建 circRNA-miRNA-mRNA网络,综合探讨circRNA在LSCC颈部淋巴结转移中的调控机制。方法1.选择颈淋巴结转移阳性的LSCC患者（n=2）及颈淋巴结转移阴性的LSCC患者（n=1）的肿瘤组织标本与颈部淋巴结组织标本。分别提取不同标本中的总RNA,并进行质检。2.利用ceRNA芯片高通量测序技术,以log2|fold change|＞1,校正后P值＜0.05为标准,分析颈淋巴结转移阳性的喉癌组织及淋巴结组织中circRNA和mRNA的表达谱变化。3.通过种子序列匹配,找到circRNA-miRNA调节对与mRNA-miRNA调节对,将circRNA—miRNA调节对和mRNA—miRNA调节对整合获得交集miRNA,对交集中的circRNA和mRNA进行相关性系数分析,找到有效的circRNA—mRNA关系对,并构建基于ceRNA原理的circRNA-miRNA-mRNA网络。4.应用DAVAID软件对网络中有ceRNA关系的调节基因进行GO及KEGG通路富集分析。结果1.CeRNA芯片技术分析显示,颈淋巴结转移阳性的LSCC组织中共有8032种circRNA及3205种mRNA的表达水平存在显著差异,其中有3603种circRNA及1404种mRNA表达上调,4429种circRNA及1801种mRNA表达下调;颈淋巴结转移阳性的淋巴组织中共有4280种circRNA及1536种mRNA存在显著差异表达,其中包括922种circRNA及636种mRNA表达上调,3358种circRNA及900种mRNA表达下调。2.颈淋巴结转移阳性LSCC组织的ceRNA调节网络中包含250个circRNA-miRNA调节对及225个mRNA-miRNA调节对,总计159个circRNA（29个表达上调,130个表达下调）,179个mRNA（21个表达上调,158个表达下调）;颈淋巴结转移阳性淋巴组织的ceRNA调节网络中包含115个circRNA-miRNA 调节对及 106 个 mRNA-miRNA 调节对,总计 60 个 circRNA（表达均下调）,78个mRNA（1个表达上调,77个表达下调）。3.共计8位circRNA同时存在于两组ceRNA网络调节图中（包括hsacirc0024329、hsacirc0061347、hsacirc0074574、hsacirc0024328、hsacirc0074576、hsacirc0068500、hsacirc0024325、hsacirc0051131）,且表达均下调。4.下游靶基因的 GO 及KEGG通路富集分析显示靶基因主要在外泌体、细胞膜等区域明显富集,并可能通过钙离子信号通路等途径参与调控LSCC的颈淋巴结转移。结论颈淋巴结转移阳性的LSCC组织和淋巴结组织中存在circRNA的差异表达,其可能通过复杂的信号通路及生物学过程参与LSCC患者的颈部淋巴结转移,有望成为评估潜在淋巴结转移及分子靶向治疗的生物标志物。
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