【摘 要】
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目的:探索miRNA-146a-5p通过调控LRRC15的表达对骨肉瘤细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法:(1)通过miRNA公共数据库,预测可能作用于LRRC15的上游miRNA,通过生物信息学分析得出与LRRC15结合保守度最高的miRNA。(2)通过实时荧光定量PCR检测预测得到的miRNA-146a-5p在骨肉瘤细胞株Saos-2、MG-63及人成骨细胞h FOB1.19中的表达水平,明确其
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目的:探索miRNA-146a-5p通过调控LRRC15的表达对骨肉瘤细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法:(1)通过miRNA公共数据库,预测可能作用于LRRC15的上游miRNA,通过生物信息学分析得出与LRRC15结合保守度最高的miRNA。(2)通过实时荧光定量PCR检测预测得到的miRNA-146a-5p在骨肉瘤细胞株Saos-2、MG-63及人成骨细胞h FOB1.19中的表达水平,明确其与骨肉瘤的相关性。(3)将miRNA-146a-5p模拟物及抑制物分别转染至骨肉瘤细胞株Saos-2当中,通过实时荧光定量PCR检测其转染效率。待完成转染后,利用Western-blot技术检测LRRC15蛋白的表达变化情况。细胞划痕实验检测miRNA-146a-5p的表达改变对于骨肉瘤细胞株迁移能力的影响,CCK-8法研究miRNA-146a-5p的表达改变对于骨肉瘤细胞株增殖能力的影响,Transwell实验研究miRNA-146a-5p的表达改变对于骨肉瘤细胞株侵袭能力的影响。结果:(1)利用Targetscan、miRDB、miRcode三个公共数据库检索与LRRC15相关的miRNA,并通过venn在线网站分析三个数据库的共同靶基因,发现包括miRNA-146a-5p在内,共有三个miRNA被预测为LRRC15的上游靶向miRNA。生物信息学的结果显示,miRNA-146a-5p与LRRC15的结合位点具有最高保守度。这表明,miRNA-146a-5p与LRRC15之间存在靶向关系,miRNA-146a-5p可能是LRRC15的上游miRNA。(2)实时荧光定量PCR(RT-q PCR)发现,与人成骨细胞(OB)h FOB1.19相比,miRNA-146a-5p在骨肉瘤细胞株Saos-2、MG-63中呈低表达(P<0.01)。(3)转染miRNA-146a-5p模拟物可以显著提高骨肉瘤细胞株Saos-2中miRNA-146a-5p的表达量(P<0.001),还可使LRRC15蛋白的表达量明显下降(P<0.01),并且可以使得Saos-2细胞的迁移、增殖及侵袭能力大幅减弱(P<0.01)。转染miRNA-146a-5p抑制物能够使骨肉瘤细胞株Saos-2内miRNA-146a-5p的表达水平显著下降(P<0.01),同时可使LRRC15蛋白的表达水平明显上调(P<0.001),并且可以使得Saos-2细胞的迁移、增殖及侵袭能力大幅增加(P<0.01)。结论:miRNA-146a-5p通过降低LRRC15的表达抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭及转移。
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