【摘 要】
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目的:溃疡性结肠炎因发病机制暂不明确,尚无特效药物治疗。绞股蓝在传统中药中有着悠久历史,其主要成分绞股蓝皂苷有着抗炎活性和调节肠道菌群的作用,但对于溃疡性结肠炎的作用及机制尚未研究,因此我们观察口服绞股蓝皂苷对右旋糖酐硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(UC)的治疗作用,并初步探究其作用机制。方法:本课题选用8~10周龄雄性C57BL/6小鼠(21~24g),随机分为6组,每组8只:分别为对照
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目的:溃疡性结肠炎因发病机制暂不明确,尚无特效药物治疗。绞股蓝在传统中药中有着悠久历史,其主要成分绞股蓝皂苷有着抗炎活性和调节肠道菌群的作用,但对于溃疡性结肠炎的作用及机制尚未研究,因此我们观察口服绞股蓝皂苷对右旋糖酐硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(UC)的治疗作用,并初步探究其作用机制。方法:本课题选用8~10周龄雄性C57BL/6小鼠(21~24g),随机分为6组,每组8只:分别为对照组(NC)、模型组(Vehicle)、柳氮磺吡啶组(SASP 0.45g/kg)、绞股蓝皂苷高、中、低剂量组(GP-H,GP-M,GP-L 400mg/kg 200mg/kg 100mg/kg),除了对照组自然饮用纯净水,其余各组通过3%DSS建立溃疡性结肠炎小鼠模型。NC组和Vehicle组每日予以生理盐水灌胃,柳氮磺吡啶组和不同剂量的绞股蓝皂苷组每日给与相应剂量的药物灌胃。观察小鼠的一般状况、体重变化,处理7天后,留取小鼠血清及结肠组织,比较各组小鼠结肠长度。然后进行疾病活动指数评分、HE染色进行病理组织学评分、通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、实时荧光定量PCR、蛋白免疫印记(Western Blot)、免疫荧光染色等实验方法评估绞股蓝皂苷对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠的疗效及探究初步作用机制。结果:1.我们发现与NC组对比,Vehicle组小鼠体重明显下降,我们使用高中低剂量的绞股蓝皂苷和柳氮磺吡啶处理后,观察到GP-H组、GP-M组、GP-L组和SASP组缓解UC小鼠体重下降程度(P<0.01)。2.小鼠使用3%DSS造模第5天后,Vehicle组小鼠与NC组相比,疾病活动指数评分明显增高,然而,与Vehicle组比较,GP-H组、GP-M组、GP-L组和SASP组疾病活动指数评分增长速度减慢,DAI评分明显低于Vehicle组(P<0.001)。3.Vehicle组小鼠与NC组相比,结肠明显缩短(P<0.01)。与Vehicle组比较,GP-H组、GP-M组、GP-L组和SASP组明显抑制小鼠结肠缩短(P<0.01,P<0.05)。4.Vehicle组小鼠与NC组相比,结肠粘膜结构破坏严重,隐窝和杯状细胞广泛缺失,粘膜层及粘膜下层有出血、水肿及大量炎症细胞浸润。与NC组比较,Vehicle组小鼠结肠组织病理学评分明显升高(P<0.01)。然而,GP-H组、GP-M组、GP-L组和SASP组小鼠结肠结构清晰可见,只有少量或中量的炎症细胞渗入粘膜层或粘膜下层,轻度水肿,少量的杯状细胞减少。与Vehicle组比较,绞股蓝皂苷高中低剂量组和SASP组均能显著降低结肠组织病理学评分(P<0.01,P<0.05)。5.各组小鼠结肠组织中Occludin、ZO-1、MUC2蛋白的Western Blot和免疫荧光染色结果显示,GP-H组和SASP组能明显增加溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜粘蛋白MUC2的分泌及紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达(P<0.01,P<0.05)。6.观察各组小鼠血清和结肠组织中IL-6和TNF-α炎症因子变化,结果显示与Vehicle组对比,GP-H组和SASP组能显著下调溃疡性结肠炎小鼠中促炎细胞因子IL-6和TNF-αm RNA和蛋白水平(P<0.01)。结论:绞股蓝皂苷能促进粘蛋白MUC2的分泌和紧密连接蛋白Occludin、ZO-1的表达,增强DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎粘膜屏障功能,从而减轻小鼠肠粘膜损伤。
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