第一章我国2015-2016年间头孢耐药菌株的分子生物学研究研究背景:广谱头孢菌素类药物（ESCs）是治疗淋病的最后可单独使用的一线用药,中国淋球菌耐药性监测项目（China-GRSP）研究发现,淋球菌对ESCs的耐药水平正在不断提高。2016年,我国首次报道出现头孢曲松高度耐药的淋病奈瑟菌--FC428相关菌株,淋球菌耐药形势严峻。本文对2015-2016年间在我国收集的ESCs耐药菌株进行回顾性研究,通过分子流行病学分析,鉴定其基因分型和基因突变类型,探究我国ESCs耐药的流行菌株与国际流行菌株之间的简要联系。研究方法:2015年至2016年间,从China-GRSP收集了 2038株淋球菌分离株。采用琼脂稀释法测定对头孢曲松、头孢克肟、阿奇霉素、磷霉素、环丙沙星和青霉素进行药物敏感性实验。采用淋病奈瑟菌多抗原序列分型（NG-MAST）、MLST和NG耐药性序列分型（NG-STAR）方法,研究头孢菌素耐药分离株的基因分型和相关的基因突变类型。结果:在2038株淋球菌分离株中,有74株（3.6%）头孢菌素类耐药分离株。头孢克肟耐药（CFX-R）分离株中最常见的基因分型是MLST ST7363,头孢曲松耐药（CRO-R）分离株中最常见的是MLST ST 7365（n=8）。CFX-R菌株中penA-X（n=27,44.3%）、penA-ⅩⅢ（n=6,9.8%）、penA-ⅩⅧ（n=5,8.2%）基因突变的比例较高,而 CRO-R 菌株中 penA-ⅩⅧ（n=10,25.6%）、penA-43（n=9,23.1%）、penA-ⅩⅢ（n=7,17.9%）基因突变的比例较高。结论:本研究发现我国主要的头孢菌素耐药克隆包括本土流行株和国际流行株。头孢曲松和头孢克肟耐药菌株主要与penA基因突变有关,但对头孢曲松和头孢克肟耐药的相关优势基因不同。随着国际旅行的增加,追踪特殊耐药基因型,识别高危耐药基因突变与流行病学特征的关系,对改善公共卫生至关重要。为监测我国淋球菌对抗生素的耐药趋势,需要继续加强China-GRSP对耐药菌株的监测。第二章FC428菌株的分子生物学研究和对美罗培南等药物的敏感性监测研究背景:2016年,北京首次报道出现头孢曲松高度耐药的淋病奈瑟菌--FC428相关菌株。此后,FC428相关菌株在南京、上海、苏州、杭州、成都、长沙等地区相继出现,FC428相关菌株在我国出现流行趋势,使得淋病的临床治疗面临着巨大的挑战。本研究的目的是鉴定2016-2020年新发现的FC428相关菌株的基因分型,研究国内外FC428相关菌株的亲缘关系,并评估其对美罗培南等9种可能用于淋病感染中的抗生素的敏感性,为耐药菌株寻求备选治疗方案。方法:在2016-2020年间,China-GRSP共收集了 24株FC428相关菌株。采用NG-MAST、MLST和NG-STAR分型方法菌株进行分型,以研究FC428相关菌株的基因分型。采用系统发育分析方法研究国内外的FC428相关菌株的亲缘关系。采用琼脂稀释法,进行药物敏感性试验,测定FC428相关菌株对多西环素、米诺环素、美罗培南、磷霉素、盐酸小檗碱、头孢噻肟、头孢他啶、头孢呋辛和zoliflodacin的最低抑菌浓度（MICs）。结果:24株FC428相关菌株覆盖了我国7个省份,且各地发现的菌株数量正在逐年增加。这24株菌株主要的基因型是MLST SH903、NG-MAST ST3435、NG-STAR ST233,除了现有的基因型,还发现了尚未命名的新基因型。多西环素、米诺环素、美罗培南、磷霉素、盐酸小檗碱、头孢噻肟、头孢他啶、头孢呋辛和zoliflodacin 的 MIC 范围分别为 0.5-2mg/L、≤0.05-2mg/L、0.03-0.125mg/L、16-64mg/L、8-64mg/L、4-32mg/L、4-16mg/L、8 至≥64mg/L 和≤0.06-0.125 mg/L。结论:本研究发现,耐头孢曲松的淋病奈瑟菌FC428相关克隆在我国已经出现流行趋势,我国的优势菌株与国际流行株密切相关,且我国的耐药菌株在国际传播中发挥了重要作用。在体外实验中,美罗培南、磷霉素、盐酸小檗碱和zoliflodacin表现出良好的抗淋球菌活性,可能成为头孢菌素耐药菌株的备选治疗药物。为延缓淋病无药可医困境的出现,需要坚持以下策略:加强淋球菌对抗生素的耐药性监测;优化检测方法,及时发现耐药菌株;规范临床治疗方案,个性化用药;寻找有效抗生素,制定备选治疗方案。