巨噬细胞作为关键的一类免疫细胞,不仅是机体抵御病原体侵袭的第一道防线,也可通过极化分型发挥不同功能,当极化成M1型时能分泌促炎因子引起过度炎症反应从而造成多种炎症性疾病,当极化成M2型时能分泌抗炎因子,发挥抗炎作用,其动态可塑性调控细胞介导组织损伤和修复功能,在炎症发生、增生和愈合阶段发挥重要作用。自噬修复损伤的细胞器,调节蛋白质的再循环,在细胞存活、发育、免疫调控、胞内稳态和疾病发生发展中起重要作用。因此,通过调节巨噬细胞表型平衡和自噬调控作用来维持细胞稳态是非常值得研究的话题。目前研究发现1,25（OH）2D3不仅参与调节体内钙磷代谢,在免疫调控方面也发挥一定作用,1,25（OH）2D3在巨噬细胞自噬发挥的作用是通过不同通路体现的,能够调节自噬和凋亡之间的平衡来减轻过度炎症,同时,1,25（OH）2D3能减少巨噬细胞浸润,通过平衡极化表型来改善炎症造成的组织损伤,但是1,25（OH）2D3对巨噬细胞极化和自噬的调控机制还不清楚。因此,本研究目的是为了探讨1,25（OH）2D3是如何影响巨噬细胞极化和自噬的。具体内容如下:（1）本研究通过分离培养黄颡鱼头肾巨噬细胞的原代细胞,利用形态学分析、生物功能分析和基因表达分析来研究1,25（OH）2D3对黄颡鱼头肾巨噬细胞极化的影响。采用LPS和c AMP诱导巨噬细胞极化后,通过分析细胞形态、存活率、吞噬能力、产生活性氧和一氧化氮的能力、超氧阴离子自由基活力和精氨酸酶活性来研究功能变化,最后通过实时定量PCR检测不同极化状态下巨噬细胞的基因表达。结果如下:1,25（OH）2D3降低诱导后M1型和M2型巨噬细胞的死亡率,并增强巨噬细胞的吞噬活性。在M1型巨噬细胞中1,25（OH）2D3能够抑制活性氧（ROS）和炎症介质一氧化氮（NO）的产生,降低超氧阴离子自由基的活力,白介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达水平显著降低（P＜0.05）;在M2型细胞中能够增加精氨酸酶的活性,显著增加白介素10（IL-10）和转化生长因子（TGF-β）的表达水平（P＜0.05）,最终抑制巨噬细胞向M1表型极化,促进巨噬细胞向M2表型极化,发挥抗炎作用;黄颡鱼头肾巨噬细胞中Nos2和Arg2分别是M1和M2巨噬细胞的生物标记基因。研究结果为进一步研究鱼类巨噬细胞极化以及1,25（OH）2D3对极化调节的影响提供了重要的依据。（2）本实验在巨噬细胞结合自噬抑制剂氯喹以及1,25（OH）2D3孵育作用,LPS和c AMP分别诱导极化后,分别使用MDC染色检测细胞自噬水平,油红O染色检测脂滴积累,检测了胞内总胆固醇和游离胆固醇的变化情况,同时也对活性氧、一氧化氮、超氧阴离子自由基和精氨酸酶等极化标志物测定,最后结合实时定量PCR检测自噬关键基因、胆固醇流出相关基因、NLRP3炎性小体基因和极化标志基因,从而进一步揭示1,25（OH）2D3对黄颡鱼头肾巨噬细胞自噬和极化的影响。结果如下:抑制自噬之后,细胞向M1型分化显著增加,向M2型细胞分化显著降低,抑制自噬能改变极化方向,但是极化不能改变自噬表达。M1型M2型细胞中都存在自噬行为,自噬抑制剂处理均可以抑制细胞自噬水平,1,25（OH）2D3孵育后可增加M2型细胞自噬水平。结果表明,NLRP3炎性体的激活与自噬呈负相关性,增加自噬可抑制NLRP3炎性体表达,1,25（OH）2D3可能通过增加自噬活性、促进胆固醇流出,抑制NLRP3炎性体表达,促进抗炎因子表达,最终通过自噬促进细胞向M2型极化。