油茶花药瓣化败育的细胞学特征

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油茶(Camellia oleifera)因不占用耕地可以提供给人们食用的优质粮油,对南方山区扶贫攻坚和保障国家粮油安全具有重要作用,所以油茶产业得到了政策扶持,并快速发展。但油茶产业的发展主要受到资源培育环节的限制,特别是在良种选育和栽培措施上,主要表现为地方良种选育起步晚、栽培技术落后,使油茶在生产中表现为“千花一果”的低坐果率现象。我们在生产中主推的国审油茶品种‘华硕’种群中发现的雄性不育株,可以省去人工去雄加速良种选育进程,也可以直接利用于生产增加异花授粉几率来提高坐果率。油茶花发育从花芽分化到散粉经历至少6个月时间,发育时间长且复杂,目前发现的雄性不育株还存在败育关键时期和主要方式不清楚等问题。阐明不育株的败育时期和方式,将有助于雄性不育株的利用和败育分子机理的研究,对此,本研究利用手机微距、体式镜、扫描电镜等方法对不育株进行形态学观察,明确不育株败育的时期和花药败育的类型;采用石蜡切片结合光镜观察法,从光镜显微水平进行了结构观测,对比研究了不育株花药瓣化败育的细胞学方式;对不育株瓣化花药产生的花粉进行氯化三苯基四氮唑法(TTC)法、离体萌发法、活体萌发法进行功能测定,评估了花粉活力及其应用的可能。本研究通过对不育株瓣化花药的形态学观测、结构观察和花粉功能测定,系统的研究了花药瓣化败育的细胞学机制,还在研究中发现“螺纹状”花粉的真实身份,为‘华硕’不育株和油茶花粉的研究利用提供了理论基础。研究结果如下:(1)不育株花药瓣化败育主要有完全瓣化和半瓣化两种类型在不育株花芽分化阶段,7月中旬,雄蕊完成花药和花丝分化后,部分花药完全瓣化,不产生花粉。而另一部分花药表现为花药上部呈瓣化状,厚度为109.70±22.55μm,与花瓣厚度不存在显著差异;花药上部瓣化区域长度占整个花药长度的52.33%,而花药下部具有正常花药结构;下部具有正常结构的花药可以产生903±380粒花粉,而可育株正常花药产生了3641±1391粒花粉。(2)不育株花药瓣化的原因是第二阶段的孢原细胞平周分裂被抑制本研究将油茶花药从雄蕊原基发育到散粉的整个发育过程划分成14个阶段,不育株花药发育到第2阶段/雌雄蕊分化阶段时,孢原细胞主要以花芽里的子房为中心作垂周分裂抑制平周分裂,分裂形成的细胞分化为薄壁组织,导致花药扁平化不能形成花粉囊。(3)不育株半瓣化花药中绒毡层和胼胝质异常导致形成活力低的花粉半瓣化类型的花药在第6-7阶段时,绒毡层厚度较正常花药更薄,并存在极显著差异,绒毡层结构异常导致胼胝质合成受到影响,这导致花粉母细胞不规则皱缩;在10阶段绒毡层液泡化提前降解,而正常花药在13阶段才降解,导致形成的花粉内含物缺失,花粉活力经TTC和离体萌发检测仅为正常花粉活力的3.24%、11.20%。(4)螺纹状花粉实际是负责花药开裂的唇细胞以往认为的油茶第二种形态的花粉(被称作:条纹状花粉、败育花粉、拟花粉、第二种类型油茶花粉、pseudopollen、empty pollen、false pollen)实际是负责花药开裂的唇细胞,唇细胞具有的大液泡结构,有利于在晴朗天气——传粉者活跃时快速失水使花药开裂完成散粉。唇细胞的细胞核呈特异性分布,可能与裂口隔膜、唇细胞分化、快速失水有关。以往的研究可能低估了油茶花粉自身的活力。
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