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摘要：目的 建立高效液相色谱方法测定肝泰舒胶囊中獐牙菜苦苷含量的方法。方法 采用Waters Symmetry-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈-0.02%磷酸为流动相进行梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，检测波长为250 nm，柱温为室温。结果 獐牙菜苦苷在0.373 556～2.988 448 μg范围内呈良好的线性关系（r2=1.000 0），平均回收率为106.81%，RSD=3.7%。结论 该方法快捷、准确、简便、重复性好，可用于肝泰舒胶囊的质量控制。
关键词：肝泰舒胶囊；含量测定；獐牙菜苦苷
肝泰舒胶囊是由獐牙菜、唐古特乌头、节裂角茴香等8味药组成的中药复方制剂，具有清热解毒、疏肝利胆的功效。原标准收载于国家食品药品监督管理局《国家中成药标准汇编》中成药地方标准上升国家标准部分：内科肝胆分册[1]，执行标准为WS-10133 （ZD-0133）-2002。其检验项目为薄层色谱扫描法测定齐墩果酸。因齐墩果酸作为含量测定指标，在獐牙菜药材中不具有专属性，故本研究采用高效液相色谱法（HPLC）对獐牙菜药材中的专属性指标成分獐牙菜苦苷进行研究，以紫外检测器对制剂中獐牙菜苦苷进行含量测定，建立肝泰舒胶囊的质量控制方法。
1 仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪，紫外检测器SK2200HP型超声波振荡仪。
獐牙菜苦苷（批号110785-200203）购自中国食品药品检定研究院。肝泰舒胶囊，青海京珠藏药高新技术产业股份有限公司（批号20111021）提供。乙腈（色谱纯，Burdic&Jackson），水为Milli-Q超纯水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Waters C18（5 ?m，250 mm×4.6 mm）；以乙腈（A）-0.02%磷酸（B）为流动相进行梯度洗脱（0～21 min，91%B；21～25 min，60%B；25～30 min，60%B）；流速：1.0 mL/min；检测波长：240 nm；进样量：10 ?L。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取獐牙菜苦苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，备用。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品内容物，研细，取0.5 g精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理（500 W，40 kHz）1 h，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，滤液用微孔滤膜（0.45 ?m）滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 取缺獐牙菜肝泰舒胶囊试样（自制），按“2.2.2”项下方法制备，得阴性对照溶液。结果在獐牙菜苦苷峰对应的保留时间处无干扰。色谱图见图1。
2.3 线性关系考察
精密称取獐牙菜苦苷对照品19.87 mg（含量94.0%），置25 mL容量瓶中，以甲醇为溶剂，配置系列浓度为37.355 6、74.711 2、149.422 4、224.133 6、298.844 8 μg/mL的獐牙菜苦苷对照品溶液，测定峰面积，以对照品的进样量为横坐标，以对照品的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程方程为：Y=9410.241 2X-4.791 7，r2=1.000 0，獐牙菜苦苷在0.373 556～2.988 448 μg范围内呈良好的线性关系。
2.4 精密度试验
精密吸取獐牙菜苦苷对照品溶液，连续进样5次，测得峰面积，獐牙菜苦苷峰面积RSD=1.4%。
2.5 重复性试验
取同一批样品9份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，记录色谱峰的峰面积，计算含量。结果獐牙菜苦苷含量的平均值为每粒7.88 mg，RSD=1.1%，表明本方法重复性较好。
2.6 稳定性试验
取同一批样品的供试品溶液，置室温下放置，每间隔2 h或4 h测定1次，连续测8次，结果24 h内RSD小于3.0%，表明供试品溶液在24 h内稳定性较好。
2.7 加样回收率试验
精密称取已知含量的样品6份（獐牙菜苦苷20.587 2 mg/g），每份各约0.25 g。各精密加入对照品溶液5 mL（浓度0.762 904 mg/mL，相当于獐牙菜苦苷对照品3.814 52 mg），按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算加样回收率，结果见表1。
3 讨论
本试验采用HPLC测定肝泰舒胶囊中的獐牙菜苦苷含量，采用紫外检测器，使所测定的成分达到有效的分离。
提取溶剂分别采用甲醇、乙醇及50%乙醇，对獐牙菜苦苷含量的测定结果没有显著差异，但以乙醇及50%甲醇作为溶剂时色谱峰较多，故选用甲醇作为提取溶剂。
分别采用超声、回流两种提取方式，并设定不同的提取时间，对獐牙菜苦苷的含量进行测定，结果表明超声30 min为最佳提取方式。
分别采用甲醇和乙腈作为流动相[2-3]对样品的分离作比较，结果以乙腈-0.02%的磷酸为流动相分离较好，同时，为保证其他成分对检测数据不干扰，以大比例乙腈冲柱。
因中国食品药品检定研究院目前提供的獐牙菜苦苷为鉴别用对照品，在使用之前采用面积归一化法，对其纯度进行测定。本试验根据2010年版《中华人民共和国药典》（一部）标准研究课题任务书的要求，增加了肝泰舒胶囊中獐牙菜苦苷的含量，可以更全面地控制产品的质量，保证临床用药的安全有效。
从含量测定结果可以看出，随着生产日期的变化，獐牙菜苦苷的含量随放置时间的延长呈明显的降低趋势。
参考文献：
[1] 国家食品药品监督管理局.国家中成药标准汇编·中成药地方标准上升国家标准部分：内科肝胆[S].2002：190-193.
[2] 肖琳，贾娜，何姣，等.青叶胆药材及饮片中獐牙菜苦苷和龙胆苦苷的含量测定[J].药物分析杂志，2009，29（5）：876-879.
[3] 徐敏，张振秋.HPLC 法同时测定青叶胆中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷的含量[J].辽宁中医杂志，2013，40（1）：145-147.
关键词：肝泰舒胶囊；含量测定；獐牙菜苦苷
肝泰舒胶囊是由獐牙菜、唐古特乌头、节裂角茴香等8味药组成的中药复方制剂，具有清热解毒、疏肝利胆的功效。原标准收载于国家食品药品监督管理局《国家中成药标准汇编》中成药地方标准上升国家标准部分：内科肝胆分册[1]，执行标准为WS-10133 （ZD-0133）-2002。其检验项目为薄层色谱扫描法测定齐墩果酸。因齐墩果酸作为含量测定指标，在獐牙菜药材中不具有专属性，故本研究采用高效液相色谱法（HPLC）对獐牙菜药材中的专属性指标成分獐牙菜苦苷进行研究，以紫外检测器对制剂中獐牙菜苦苷进行含量测定，建立肝泰舒胶囊的质量控制方法。
1 仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪，紫外检测器SK2200HP型超声波振荡仪。
獐牙菜苦苷（批号110785-200203）购自中国食品药品检定研究院。肝泰舒胶囊，青海京珠藏药高新技术产业股份有限公司（批号20111021）提供。乙腈（色谱纯，Burdic&Jackson），水为Milli-Q超纯水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Waters C18（5 ?m，250 mm×4.6 mm）；以乙腈（A）-0.02%磷酸（B）为流动相进行梯度洗脱（0～21 min，91%B；21～25 min，60%B；25～30 min，60%B）；流速：1.0 mL/min；检测波长：240 nm；进样量：10 ?L。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取獐牙菜苦苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，备用。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品内容物，研细，取0.5 g精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理（500 W，40 kHz）1 h，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，滤液用微孔滤膜（0.45 ?m）滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 取缺獐牙菜肝泰舒胶囊试样（自制），按“2.2.2”项下方法制备，得阴性对照溶液。结果在獐牙菜苦苷峰对应的保留时间处无干扰。色谱图见图1。
2.3 线性关系考察
精密称取獐牙菜苦苷对照品19.87 mg（含量94.0%），置25 mL容量瓶中，以甲醇为溶剂，配置系列浓度为37.355 6、74.711 2、149.422 4、224.133 6、298.844 8 μg/mL的獐牙菜苦苷对照品溶液，测定峰面积，以对照品的进样量为横坐标，以对照品的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程方程为：Y=9410.241 2X-4.791 7，r2=1.000 0，獐牙菜苦苷在0.373 556～2.988 448 μg范围内呈良好的线性关系。
2.4 精密度试验
精密吸取獐牙菜苦苷对照品溶液，连续进样5次，测得峰面积，獐牙菜苦苷峰面积RSD=1.4%。
2.5 重复性试验
取同一批样品9份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，记录色谱峰的峰面积，计算含量。结果獐牙菜苦苷含量的平均值为每粒7.88 mg，RSD=1.1%，表明本方法重复性较好。
2.6 稳定性试验
取同一批样品的供试品溶液，置室温下放置，每间隔2 h或4 h测定1次，连续测8次，结果24 h内RSD小于3.0%，表明供试品溶液在24 h内稳定性较好。
2.7 加样回收率试验
精密称取已知含量的样品6份（獐牙菜苦苷20.587 2 mg/g），每份各约0.25 g。各精密加入对照品溶液5 mL（浓度0.762 904 mg/mL，相当于獐牙菜苦苷对照品3.814 52 mg），按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算加样回收率，结果见表1。
3 讨论
本试验采用HPLC测定肝泰舒胶囊中的獐牙菜苦苷含量，采用紫外检测器，使所测定的成分达到有效的分离。
提取溶剂分别采用甲醇、乙醇及50%乙醇，对獐牙菜苦苷含量的测定结果没有显著差异，但以乙醇及50%甲醇作为溶剂时色谱峰较多，故选用甲醇作为提取溶剂。
分别采用超声、回流两种提取方式，并设定不同的提取时间，对獐牙菜苦苷的含量进行测定，结果表明超声30 min为最佳提取方式。
分别采用甲醇和乙腈作为流动相[2-3]对样品的分离作比较，结果以乙腈-0.02%的磷酸为流动相分离较好，同时，为保证其他成分对检测数据不干扰，以大比例乙腈冲柱。
因中国食品药品检定研究院目前提供的獐牙菜苦苷为鉴别用对照品，在使用之前采用面积归一化法，对其纯度进行测定。本试验根据2010年版《中华人民共和国药典》（一部）标准研究课题任务书的要求，增加了肝泰舒胶囊中獐牙菜苦苷的含量，可以更全面地控制产品的质量，保证临床用药的安全有效。
从含量测定结果可以看出，随着生产日期的变化，獐牙菜苦苷的含量随放置时间的延长呈明显的降低趋势。
参考文献：
[1] 国家食品药品监督管理局.国家中成药标准汇编·中成药地方标准上升国家标准部分：内科肝胆[S].2002：190-193.
[2] 肖琳，贾娜，何姣，等.青叶胆药材及饮片中獐牙菜苦苷和龙胆苦苷的含量测定[J].药物分析杂志，2009，29（5）：876-879.
[3] 徐敏，张振秋.HPLC 法同时测定青叶胆中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷的含量[J].辽宁中医杂志，2013，40（1）：145-147.