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摘要：目的：评价结核酶联免疫斑点试验（T-SPOT.TB）在快速诊断结核病的临床意义。方法：对我院确诊或疑诊结核患者进行 T-SPOT.TB 检测，检测其诊断结核病的灵敏度及特异度。结果：在结核性疾病T-SPOT TB检测灵敏度为 90%（72/80），特异度为91.2%（62/68）。肺结核组T-SPOT.TB检测灵敏度为92.8 %（52/ 56），结核性胸膜炎组，检测灵敏度为83%（20/24）。结论：T-SPOT.TB 试验在临床诊断结核中，快速且敏感，对结核性疾病诊断有重要价值。
关键词：酶联免疫斑点试验；结核病；灵敏度；特异度
结核病是危及人类健康的重大公共卫生问题之一，我国流行病学调查发现在我国每年因结核病导致的死亡人数达到13万人[1]，且有逐年上升的趋势。传统的结核菌素皮试（TST）及结核菌素纯蛋白衍生物作为结核感染诊断技术，其敏感性及特异性较差，导致很多的结核病人漏诊和误诊，延误了治疗。发展能用于诊断结核的快速敏感的实验室技术成为当前医学界迫切之需。酶联免疫斑点（enzyme linked immunospot assay，EL ISPOT）技术是一种新型的免疫酶技术，从单细胞水平检测分泌抗体细胞或分泌细胞因子细胞。由 EL ISPOT发展而来的结核感染 T细胞斑点试验技术（T-SPOT.TB），使用结核分枝杆菌特异性抗原刺激外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells，PB-MC），通过细胞因子γ干扰素（IFN- γ）的分泌检测抗原特异性 T淋巴细胞的应答反应，从而判断结核感染状态，具有较高的敏感性和特异性[2]。Kim等[3]随诊72例疑似肺外结核患者的前瞻性研究显示，对于活动性肺外结核，T-SPOT.TB和PPD的敏感性分别为94%和47%，本文就 T-SPOT.TB检测对结核性疾病的诊断价值进行初步探讨，为结核病的早期诊断及疗效判断提供一种快捷、灵敏的方法。
1 资料与方法
1.1 一般资料 对 2012年1月至 2014年1月我院结核科疑诊或待排结核患者在进行其他详细检查基础上同时行T-SPOT.TB检测。其中结核组80例，年龄在22-76岁，其中肺结核56例，结核性胸膜炎24例。结核性疾病组68例，其中健康者20例，余48例为排除结核的呼吸道感染病人。根据以下标准分组[3]，（1）确诊组，包括肯定结核性疾病：结核杆菌培养试验阳性；很可能结核性疾病：结核杆菌培养阴性，但临床表现、影像学或病理学检查支持结核，且抗结核治疗有效；（2）非结核病组：临床表现明确系其他疾病所致，或者经其他治疗病情改善。
1.2 方法 T-SPOT.TB试验：本实验采用上海复星长征医学科学有限公司提供的试剂盒，严格按照试剂盒内程序操作。基本步骤如下：取枸橼酸钠抗凝静脉血5 ml，分离 PBMC放在包被 INF-γ抗体的微孔板，加入结核特异性抗原早期分泌靶向抗（ESAT-6）和培养滤过蛋白（CFP-10）作为刺激原，温箱培养24 h后，洗去抗原致敏效应T淋巴细胞，加入生物素标记的二抗，再经酶联显色，在细胞因子分泌的地方形成斑点，通过记录斑点数检测结核特异抗原致敏的效应T淋巴细胞数量。结果判断：当空白对照孔内斑点数<6时，任一实验孔斑点数减去空白孔斑点数≥6，结果即为阳性；若空白对照孔斑点数>6，任一实验孔斑点数大于空白孔斑点数的两倍，结果也表示阳性。
2 结果
确诊结核组病例80例，检测结果阳性72例，检测灵敏度为 90%（72/80）。正常对照组：共检测68例，检测结果阳性6例，阴性62例，特异度为91%（62/68）。T-Spot.TB试验结果分布见表一和表二。
3 讨论
结核病人能否得到早期诊断及治疗是决定其预后的关键，也是目前我国结核病防治的重点。基于T细胞的γ干扰素释放试验（IGRA）是结核病诊断领域的最新进展。本研究发现，确诊结核组病例80例，检测结果阳性72例，检测灵敏度为 90%（72/80）。正常对照组共检测68例，检测结果阳性6例，阴性62例，特异度为91%（62/68）。而对于肺结核组及结核性胸膜炎组，T-SPOT.TB检测灵敏度分别为92.8 %（52/56）及83%（20/24）。因此T-SPOT.TB对判断是否感染结核与临床证实的活动性结核相符，将其作为判定结核杆菌培养阴性的活动性结核病可获得满意的敏感度。同时T-SPOT.TB对于结核性胸膜炎所导致的胸腔积液的诊断，也有相当的价值。综上分析和国内外的一些相关研究[4]，T-Spot.TB技术作为一种新型的检测结核感染的免疫学方法，它大大提高了结核病检测的阳性率，可作为结核病早期诊断的一项重要检查手段，特别是临床症状不典型、诊断不明确及多次痰涂片、培养均为阴性的疑似结核患者，此检查方法具有较高的灵敏度和特异度[5]，对临床上结核病人的早期诊断及治疗，避免医疗纠纷的发生有着重要意义。
参考文献：
[1]全国结核病流行病学抽样调查技术指导组，全国结核病流行病学抽样调查办公室.2000 年全国结核病流行病学抽样调查报告[J].中国防痨杂志，2002，24：98-102.
[2]Al2Zamel FA.Detection and diagnosis ofMycobacterium tuberculosis.Expert Rev Anti infect Ther，2009，7（9）：1099-1108.
[3]Kim SH，Choi SJ，Kim HB，et al.Diagnostic usefulness of a T-cell based assay for extra-
Pulmonary tuberculosis.Arch Inter MED，2007，167（20）：2255-2259.
[2]Lalvani A，Pareek M.Interferon gamma release assays：principles and practice.Enferm Infecc M icrobiol Clin，2010，28（4）：245-252.
[3]叶任高，陆再英.内科学[M].5 版.北京：人民卫生出版社，2004：86-87.
[4]Diel R，Loddenkemper R，Nienhaus A.Evidence2based comparison of commercial interferon2gamma release assays for detecting active TB：ametaanalysis.Chest，2010，137（4）：952-968.
[5]史可云，胡忠义.酶联免疫斑点技术在结核病诊断中的应用现状[J].中华结核和呼吸杂志，2006，29（6）：414-416.
关键词：酶联免疫斑点试验；结核病；灵敏度；特异度
结核病是危及人类健康的重大公共卫生问题之一，我国流行病学调查发现在我国每年因结核病导致的死亡人数达到13万人[1]，且有逐年上升的趋势。传统的结核菌素皮试（TST）及结核菌素纯蛋白衍生物作为结核感染诊断技术，其敏感性及特异性较差，导致很多的结核病人漏诊和误诊，延误了治疗。发展能用于诊断结核的快速敏感的实验室技术成为当前医学界迫切之需。酶联免疫斑点（enzyme linked immunospot assay，EL ISPOT）技术是一种新型的免疫酶技术，从单细胞水平检测分泌抗体细胞或分泌细胞因子细胞。由 EL ISPOT发展而来的结核感染 T细胞斑点试验技术（T-SPOT.TB），使用结核分枝杆菌特异性抗原刺激外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells，PB-MC），通过细胞因子γ干扰素（IFN- γ）的分泌检测抗原特异性 T淋巴细胞的应答反应，从而判断结核感染状态，具有较高的敏感性和特异性[2]。Kim等[3]随诊72例疑似肺外结核患者的前瞻性研究显示，对于活动性肺外结核，T-SPOT.TB和PPD的敏感性分别为94%和47%，本文就 T-SPOT.TB检测对结核性疾病的诊断价值进行初步探讨，为结核病的早期诊断及疗效判断提供一种快捷、灵敏的方法。
1 资料与方法
1.1 一般资料 对 2012年1月至 2014年1月我院结核科疑诊或待排结核患者在进行其他详细检查基础上同时行T-SPOT.TB检测。其中结核组80例，年龄在22-76岁，其中肺结核56例，结核性胸膜炎24例。结核性疾病组68例，其中健康者20例，余48例为排除结核的呼吸道感染病人。根据以下标准分组[3]，（1）确诊组，包括肯定结核性疾病：结核杆菌培养试验阳性；很可能结核性疾病：结核杆菌培养阴性，但临床表现、影像学或病理学检查支持结核，且抗结核治疗有效；（2）非结核病组：临床表现明确系其他疾病所致，或者经其他治疗病情改善。
1.2 方法 T-SPOT.TB试验：本实验采用上海复星长征医学科学有限公司提供的试剂盒，严格按照试剂盒内程序操作。基本步骤如下：取枸橼酸钠抗凝静脉血5 ml，分离 PBMC放在包被 INF-γ抗体的微孔板，加入结核特异性抗原早期分泌靶向抗（ESAT-6）和培养滤过蛋白（CFP-10）作为刺激原，温箱培养24 h后，洗去抗原致敏效应T淋巴细胞，加入生物素标记的二抗，再经酶联显色，在细胞因子分泌的地方形成斑点，通过记录斑点数检测结核特异抗原致敏的效应T淋巴细胞数量。结果判断：当空白对照孔内斑点数<6时，任一实验孔斑点数减去空白孔斑点数≥6，结果即为阳性；若空白对照孔斑点数>6，任一实验孔斑点数大于空白孔斑点数的两倍，结果也表示阳性。
2 结果
确诊结核组病例80例，检测结果阳性72例，检测灵敏度为 90%（72/80）。正常对照组：共检测68例，检测结果阳性6例，阴性62例，特异度为91%（62/68）。T-Spot.TB试验结果分布见表一和表二。
3 讨论
结核病人能否得到早期诊断及治疗是决定其预后的关键，也是目前我国结核病防治的重点。基于T细胞的γ干扰素释放试验（IGRA）是结核病诊断领域的最新进展。本研究发现，确诊结核组病例80例，检测结果阳性72例，检测灵敏度为 90%（72/80）。正常对照组共检测68例，检测结果阳性6例，阴性62例，特异度为91%（62/68）。而对于肺结核组及结核性胸膜炎组，T-SPOT.TB检测灵敏度分别为92.8 %（52/56）及83%（20/24）。因此T-SPOT.TB对判断是否感染结核与临床证实的活动性结核相符，将其作为判定结核杆菌培养阴性的活动性结核病可获得满意的敏感度。同时T-SPOT.TB对于结核性胸膜炎所导致的胸腔积液的诊断，也有相当的价值。综上分析和国内外的一些相关研究[4]，T-Spot.TB技术作为一种新型的检测结核感染的免疫学方法，它大大提高了结核病检测的阳性率，可作为结核病早期诊断的一项重要检查手段，特别是临床症状不典型、诊断不明确及多次痰涂片、培养均为阴性的疑似结核患者，此检查方法具有较高的灵敏度和特异度[5]，对临床上结核病人的早期诊断及治疗，避免医疗纠纷的发生有着重要意义。
参考文献：
[1]全国结核病流行病学抽样调查技术指导组，全国结核病流行病学抽样调查办公室.2000 年全国结核病流行病学抽样调查报告[J].中国防痨杂志，2002，24：98-102.
[2]Al2Zamel FA.Detection and diagnosis ofMycobacterium tuberculosis.Expert Rev Anti infect Ther，2009，7（9）：1099-1108.
[3]Kim SH，Choi SJ，Kim HB，et al.Diagnostic usefulness of a T-cell based assay for extra-
Pulmonary tuberculosis.Arch Inter MED，2007，167（20）：2255-2259.
[2]Lalvani A，Pareek M.Interferon gamma release assays：principles and practice.Enferm Infecc M icrobiol Clin，2010，28（4）：245-252.
[3]叶任高，陆再英.内科学[M].5 版.北京：人民卫生出版社，2004：86-87.
[4]Diel R，Loddenkemper R，Nienhaus A.Evidence2based comparison of commercial interferon2gamma release assays for detecting active TB：ametaanalysis.Chest，2010，137（4）：952-968.
[5]史可云，胡忠义.酶联免疫斑点技术在结核病诊断中的应用现状[J].中华结核和呼吸杂志，2006，29（6）：414-416.