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摘 要：的:观察黄精对衰老大鼠学习记忆功能障碍的影响及机制。方法：以D-半乳糖致亚急性衰老大鼠为模型[1~2],同时给予黄精进行干预,6周后用Morris水迷宫试验来评价大鼠学习记忆能力，并测量海马丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性。以全面观察黄精对学习记忆的影响及机制。结果：Morris水迷宫实验，EL模型组较生理盐水组明显延长（P<0.01），黄精高剂量组较模型组明显缩短（P<0.01）；撤离平台后120s内穿过原平台象限内游泳的距离占整个游泳距离的百分比：模型组较正常组有明显差异（P<0.01），黄精高剂量组较模型组有显著性差异（P<0.01），每分钟穿越平台所在象限的次数:模型组最少，高剂量组明显增多。模型组海马SOD活性降低，MDA含量增加，与生理盐水组相比有显著性差异（P<0.01），高剂量组较模型组相比有显著性差异（0P<0.01）。结论：黄精对衰老大鼠学习记忆功能有明显的改善作用，其作用机制可能与清除自由基有关。
关键词：黄精 D-半乳糖 衰老 抗氧化能力 学习记忆
黄精为百合科黄柏属多种植物的干燥根茎，《神仙芝草经》云：“黄精宽中益气，使五脏调良，肌肉充盛，骨髓坚强，其力增倍，多年不老，颜色显明，发白更黑.齿落更生……”黄精确实具有增加免疫力、抗衰老、降血糖、降血脂、抗肿瘤等作用。近年来有较多文献报道黄精具有提高记忆力的药理作用[3~4]。为了进一步探讨黄精的作用部位及机制，本实验以D-半乳糖致衰老大鼠为动物模型，研究黄精对衰老大鼠学习记忆能力及海马组织超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量的影响，探讨黄精对学习记忆能力的影响及其作用机制。
1材料与方法
1.1实验仪器：
Morris水迷宫（北京微信斯达科技发展有限公司）；752型紫外分光光度计（山东高密分析仪器厂）；FSH-II型高速电动匀浆机（江苏金运市环宇科学仪器厂）；X H F 2 1高速离心机( 北京医用离心机厂) ；SSW型微电脑电热恒温槽（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）；电子分析天平（上海精密科学仪器厂）；XW280A旋涡混合器（上海医科大学仪器厂）。
1.2药品与试剂：
黄精购于河南省南阳市医药公司；D-半乳糖购于上海试剂二厂，批号20050422；超氧化物歧化酶( SOD ) ，丙二醛 ( MDA) 检测试剂盒( 购于南京建成生物工程研究所) 。
1.3实验方法
1.3.1 动物分组、造模及给药
选用3-4月龄雄性SD大鼠40只，体重180±20g，随机分为生理盐水组、模型组、黄精低剂量组、高剂量组共四组，每组10只。模型组、黄精低剂量组、高剂量组用3 %D-半乳糖生理盐水溶液按150mg/kg.d颈后部皮下注射6周，生理盐水组皮下注射等量的生理盐水对照；黄精高、低剂量组分别同时给与黄精水煎剂按5g/kg、2.5g/kg灌胃，模型组和生理盐水组给与等量的生理盐水，灌胃6周。
1.3.2测试指标
1.3.2.1 Morris水迷宫实验[5~6]
6周后分别让各组大鼠在Morris水迷宫进行定位航行实验(历时5天，每天上、下午各一次)，将大鼠从4个入水点面向池壁放入水中，记录120S内寻找平台的时间， 即逃避潜伏期（escape latency,EL)。找到平台后休息 20S，如果120S内找不到平台，则EL计为2min，并帮助其上平台休息，再按顺序由下一象限入水进行下一次实验。测其第5天上午的逃避潜伏期，计算其均数作为学习成绩。第5天下午进行空间探索实验，定位航行实验结束后撤除平台，然后将大鼠任选一入水点放入水中，记录120s内大鼠在平台象限的游泳距离占总距离的百分比和在120s内穿过平台所在位置的次数，以一分钟计算穿越原平台的次数，并记录大鼠在120 s内搜索平台的路线图。
1.3.2.2 测试完后将大鼠断头处死，在低温冰盘上取出海马组织，制作10%的组织匀浆，取上清液，采用黄嘌呤氧化酶法测定 SOD 活力, 以硫代巴比妥酸法测定MDA含量。具体操作按照南京建成生物工程公司试剂盒说明书方法步骤测定。
1.4统计学处理 实验数据用（x(_)±s）表示，采用方差分析和t检验处理数据。
2 结果
2.1 Morris水迷宫实验结果见表1
表1 黄精对D-半乳糖所致亚急性衰老大鼠在WMW实验的影响（x(_)±s）
与模型组比较：*P<0.01 ***P<0.01 **P>0.05 △P<0.01 ▼P<0.01 ▲P>0.05 #P<0.01 ###P<0.01 ##P>0.05
随着大鼠学习次数的增加，各组逃避潜伏期的时间逐渐缩短，表明所有大鼠均具有通过训练学习,对水下的平台的空间定位获得认知并产生记忆的能力。经过统计学分析，在WMW实验中逃避潜伏期(EL) 、撤离平台后120s内穿过原平台象限内游泳的距离占整个游泳距离的百分比及空间探索的次数模型组与生理盐水组相比均有显著性差异（P<0.01），说明造模成功，黄精高剂量组与模型组相比有显著性差异（P<0.01）,而与正常对照组相比无明显差异(P>0.05)，高剂量黄精能提高衰老大鼠的学习记忆成绩，说明黄精能明显改善衰老大鼠的学习记忆能力。
2.2大鼠海马组织SOD活性和MDA含量
表2 大鼠海马酶学检测结果（x(-)±s）
正常对照组与模型组比较▲P<0.01；高剂量组与模型组比较P<0.01。
表2可见高剂量黄精使衰老大鼠海马组织中的SOD含量显著上升（P< 0.001），MDA含量显著下降(P<0.001)。说明黄精具有强的抗氧化能力。
3 讨论
学习和记忆是两个有联系的神经活动过程，是脑的高级功能之一。学习和记忆功能的减退，甚至丧失是脑衰老的一个重要标志，也是AD的核心症状。大量实验资料和临床观察表明海马与学习记忆有关，海马神经元受损可能是学习记忆能力障碍的病理基础[7]。Morris首次应用水迷宫来研究大鼠大脑学习记忆机制, MWM现作为研究空间学习记忆的标准模式，且更适合于建立以观察海马为实验对象的实验。衰老与体内自由基的产生和抗氧化能力有相关关系。增龄可使机体的抗氧化系统能力减弱，自由基使细胞及线粒体损伤。如果不能制止自由基对细胞的破坏作用，则自由基的损伤作用就会逐渐增大，成为衰老机制之一。SOD是唯一能够特异性清除衰老启动因子--超氧阴离子自由基的抗氧化酶，而超氧阴离子自由基引起的组织脂质过氧化损伤是重要因素之一。SOD能抑制脂质过氧化, 保护细胞免受损伤, 检测其水平可反应清除自由基的程度[8]。MDA是脂质过氧化作用的终末产物，比较稳定, 其含量可反映脂质过氧化水平, 同时间接反映自由基损伤程度, 是衡量脑损伤的重要指标。本实验模型组大鼠海马组织SOD活性下降, MDA含量升高,不能及时清除氧自由基, 导致恶性循环, 神经细胞损伤更为严重。从而导致大鼠学习记忆能力下降。黄精高剂量组大鼠的学习记忆能力有明显的改善。在生化检测中, 海马组织中SOD活性明显提高，MDA含量显著降低。因为中老年人不仅阳气较弱，而且阴液多有不足，黄精其性平和，作用缓慢，久服既补脾气，又补脾阴，还有润肺生津、益肾补精的作用[9]。黄精又具有降血压、降血糖作用，还可以改善冠状动脉血流量，有降低血脂和延缓动脉粥样硬化等作用[1]，从而改善脑的血供，消除衰老动物体内自由基的增加[9]，从而延缓脑的衰老，显著地改善衰老大鼠的学习记忆能力。黄精是中老年人较理想的补养之品。
参考文献
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