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摘要：目的：建立气相色谱/质谱联用检测明胶空心胶囊中17种塑化剂，包括邻苯二甲酸二异壬酯（DINP）的方法。方法：粉碎均匀样品用乙腈提取，超声提30min后取上层清液用气相色谱/质谱联用仪测定。结果：17种塑化剂的线性关系较好，方法检出测限范围在0.01～0 24mg/kg，在高、中、低3个水平下进行明胶空心胶囊样品加标实验，平均回收率为86.68%～104.21%，相对标准偏差2.69%～5 11%（n=6）。结论：明胶空心胶囊用乙腈提取比用正己烷等溶剂提取效果好，同时方法的检出限低，且该方法简便、快捷，溶劑用量小、重现性好。关键词：明胶空心胶囊；塑化剂；邻苯二甲酸二异壬酯；气相色谱一质谱法
1引言
《中华人民共和国药典》（2015年版）第四部收载了“明胶空心胶囊”产品。《药典》规定，明胶空心胶囊除了性状、鉴别外，涉及检查项目包括松紧度、脆碎度、崩解时限、铬等13项。但未对邻苯二甲酸酯类增塑剂进行考察，而邻苯二甲酸酯类物质已被列入食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单。卫办监督函[2011]551号也明确规定了食品、食品添加剂中邻苯二甲酸二（2-乙基已脂）（DEHP）、邻苯二甲酸二异壬酯（DINP）和邻苯二甲酸二正丁酯（DBP）的最大残留量分别为1.5mg/kg、9.0mg/kg和0.3mg/kg。虽然明胶空心胶囊为药品的包装材料，但同食品一样被服用，因此，有必要关注。
目前，关于塑化剂的检测方法研究已不鲜见，大多为食品、食品包装材料、儿童玩具等方面的检测，而作为药品包装材料的明胶空心胶囊中是否含有塑化剂却未见文献报道。本方法旨在开发明胶空心胶囊中塑化剂检测新方法，为保证明胶空心胶囊质量安全提供技术支持。
2材料与方法
2.1仪器与试剂
GC 7890B-MS 5977A型气相色谱-质谱联用仪（美国Agilent公司）；AB204-N型电子分析天平（梅特勒公司），精度为0.1mg；IKA VORTEX GENIUS3圆周振荡器（广州仪科公司），运行速度≥2000rpm；KQ-300VDE型双频数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），HY-4型调速多用振荡器（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）。
玻璃器皿，天津玻璃仪器厂。注：所用玻璃器皿洗净后，用重蒸馏水淋洗三次，丙酮浸泡1h，在200℃下烘烤2h，冷却至室温备用。
16种PAEs标准品溶液（1000μg/mL，所用的溶剂为正己烷，Dr.Ehrenstorfer GmbH公司）：邻苯二甲酸二甲酯（DMP）、邻苯二甲酸二乙酯（DEP）、邻苯二甲酸二异丁酯（DIBP）、邻苯二甲酸二丁酯（DBP）、邻苯二甲酸（2-甲氧基）乙酯（DMEP）、邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯（BMPP）、邻苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯（DEEP）、邻苯二甲酸二戊酯（DPP）、邻苯二甲酸二己酯（DHXP）、邻苯二甲酸丁基苄基酯（BBP）、邻苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯（DBEP）、邻苯二甲酸二环己酯（DCHP）、邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）、邻苯二甲酸二苯酯（DPhP）、邻苯二甲酸二正辛酯（DNOP）、邻苯二甲酸二壬酯（DNP）。
邻苯二甲酸二异壬酯（DINP）标准品，纯度>99.5%，Dr.Ehrenstorfer GmbH公司。
正己烷、甲醇（色谱纯，美国TEDIA公司）；丙酮（色谱纯，美国J.T.Baker公司）；无水乙醇（色谱纯，天津科密欧公司）；乙腈（色谱纯，美国SIGMA-ALDRICH公司）。
标准溶液的配制：
将17种PAEs以正己烷溶液配制成DINP浓度为100μg/mL，其他16种PAEs浓度为lO～g/mL的标准储备液；准确移取储备液，配制成系列标准溶液，使DINP的标准曲线工作范围为2.0～100μg/mL，其他PAEs标准曲线工作范围为0.2～10.9μg/mL。
2.2方法
2.2.1样品处理：准确称取粉碎均匀的明胶空心胶囊0.5g（精确至0.1mg），置于10mL具塞玻璃离心管中，加入3mL乙腈，超声提取30min，再用2mL乙腈重复提取一次，合并提取液，定容至5.0mL，待GC/MS测定。空白实验按上述方法进行。
2.2.2气相色谱条件：色谱柱：HP-5MS石英毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm）或相当型号色谱柱；进样口温度：250℃；升温程序：初始柱温60℃，保持1min，以20℃/min升温至220℃，保持1min，再以5℃/min升温至280℃，保持10min；载气：氦气（纯度≥99.999%）；载气流速：1mL/min；进样方式：不分流进样；进样量：1μL。
2.2.3质谱条件：GC/MS接口温度：280℃；离子源温度：230℃；四级杆温度150℃；电离方式：电子轰击源（EI源）；电离能量：70eV；监测方式：选择离子扫描模式（SIM）：监测离子（参见表1）；溶剂延迟5min，17种PAEs标准物质的提取离子色谱图（EIC）见图1。
3结果与讨论
3.1提取溶剂的选择
《食品中邻苯二甲酸酯的测定》GB/T 21911-2008及《食品塑料包装材料中邻苯二甲酸酯的测定》GB/T 21928-2008中塑化剂的提取溶剂为正己烷，因此，除了甲醇、无水乙醇、丙酮等试剂外，本实验还着重比较了正己烷、乙腈、正己烷饱和乙腈等不同提取溶剂对样品中PAEs的提取效果。结果发现，乙腈对明胶空心胶囊的提取效果最佳，明显优于正己烷等溶剂，以DIBP、DBP和DEHP为例，结果如图2，3。
3.2提取方式的选择
实验室常见的提取方式有浸提、超声、震荡和涡旋，因此，本方法分别考察相同时间下，上述提取方式的提取效果。以DIBP和DBP为例，由图4可见，超声方式提取效果最佳，而震荡和浸提效果较差，且震荡和浸提两种提取方式对DBP的提取效果不佳。 3.3提取时间的确定
因超声时间可能影响溶剂对塑化剂的提取效果，特考察了超声10min、20min、30min、40min、50min、60min对塑化剂的提取效果的影响。结果显示超声30min时，提取效果最佳。超声时间延长，提取效果不再明显，反而会产生干扰。
3.4 17种塑化剂的线性方程及最低检出限
将标准储备液用正己烷稀释，使DINP的标准曲线工作范围为2.0～100μg/mL，其他PAEs标准曲线工作范围为0.2～10.0μg/mL，以塑化剂浓度（μg/mL）为横坐标，以相应的峰面积为纵坐标作标准曲线，17种塑化剂的线性回歸方程见表1。
本方法的最低检出限（LOD）为取某一低浓度的标准溶液加入空白明胶空心胶囊中，重复测定6次，以3倍信噪比时PAEs浓度计算出17种PAEs方法最低检出限LOD（mg/kg），计算结果见表1。
3.5精密度与回收率
取0.5g空白明胶空心胶囊样品，分别进行不同浓度的添加，按[2.2.1]方法处理后进行测定。结果显示，方法的平均回收率在86.68%～104.21%范围内，相对标准偏差在2.69～5.11%（n=6）范围内（见表2），该方法的重现性较好，准确度符合要求。
3.6明胶空心胶囊样品的测定
本次共测定市售明胶空心胶囊样品20批次，DEP、DIBP、DBP、DEHP均有不同程度的检出，由监测结果发现，DEP检出最高值为0.63mg/kg，检出率为25%（5120）；DIBP检出最高值为3.23mg/kg，检出率为30%（6/20）；DBP检出最高值为0.66mg/kg，检出率为20%（4/20）；DEHP检出最高值为0.41mg/kg，检出率高达40%（8/20），DINP均未检出。
如果仅以DBP、DEHP、DINP三种邻苯二甲酸酯类化合物作为判定标准的话，监测样品中共有4个产品超出国家标准限制，占明胶空心胶囊样品的20%。说明邻苯二甲酸酯类化合物在明胶空心胶囊中普遍存在，应加强对明胶空心胶囊中塑化剂的监督，特别是对DIBP的监督。
4结论
本方法用乙腈作溶剂，采用超声提取法对明胶空心胶囊中的塑化剂进行提取和GC/MS选择离子监测模式进行测定，建立了明胶空心胶囊中17种塑化剂（包括DINP）的检测方法。实验结果表明，该方法提取效果好，检出限低；处理过程简捷、快速、溶剂用量小；颠覆了传统的正己烷提取系统，为明胶空心胶囊中塑化剂的监测提供技术支持。
1引言
《中华人民共和国药典》（2015年版）第四部收载了“明胶空心胶囊”产品。《药典》规定，明胶空心胶囊除了性状、鉴别外，涉及检查项目包括松紧度、脆碎度、崩解时限、铬等13项。但未对邻苯二甲酸酯类增塑剂进行考察，而邻苯二甲酸酯类物质已被列入食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单。卫办监督函[2011]551号也明确规定了食品、食品添加剂中邻苯二甲酸二（2-乙基已脂）（DEHP）、邻苯二甲酸二异壬酯（DINP）和邻苯二甲酸二正丁酯（DBP）的最大残留量分别为1.5mg/kg、9.0mg/kg和0.3mg/kg。虽然明胶空心胶囊为药品的包装材料，但同食品一样被服用，因此，有必要关注。
目前，关于塑化剂的检测方法研究已不鲜见，大多为食品、食品包装材料、儿童玩具等方面的检测，而作为药品包装材料的明胶空心胶囊中是否含有塑化剂却未见文献报道。本方法旨在开发明胶空心胶囊中塑化剂检测新方法，为保证明胶空心胶囊质量安全提供技术支持。
2材料与方法
2.1仪器与试剂
GC 7890B-MS 5977A型气相色谱-质谱联用仪（美国Agilent公司）；AB204-N型电子分析天平（梅特勒公司），精度为0.1mg；IKA VORTEX GENIUS3圆周振荡器（广州仪科公司），运行速度≥2000rpm；KQ-300VDE型双频数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），HY-4型调速多用振荡器（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）。
玻璃器皿，天津玻璃仪器厂。注：所用玻璃器皿洗净后，用重蒸馏水淋洗三次，丙酮浸泡1h，在200℃下烘烤2h，冷却至室温备用。
16种PAEs标准品溶液（1000μg/mL，所用的溶剂为正己烷，Dr.Ehrenstorfer GmbH公司）：邻苯二甲酸二甲酯（DMP）、邻苯二甲酸二乙酯（DEP）、邻苯二甲酸二异丁酯（DIBP）、邻苯二甲酸二丁酯（DBP）、邻苯二甲酸（2-甲氧基）乙酯（DMEP）、邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯（BMPP）、邻苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯（DEEP）、邻苯二甲酸二戊酯（DPP）、邻苯二甲酸二己酯（DHXP）、邻苯二甲酸丁基苄基酯（BBP）、邻苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯（DBEP）、邻苯二甲酸二环己酯（DCHP）、邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）、邻苯二甲酸二苯酯（DPhP）、邻苯二甲酸二正辛酯（DNOP）、邻苯二甲酸二壬酯（DNP）。
邻苯二甲酸二异壬酯（DINP）标准品，纯度>99.5%，Dr.Ehrenstorfer GmbH公司。
正己烷、甲醇（色谱纯，美国TEDIA公司）；丙酮（色谱纯，美国J.T.Baker公司）；无水乙醇（色谱纯，天津科密欧公司）；乙腈（色谱纯，美国SIGMA-ALDRICH公司）。
标准溶液的配制：
将17种PAEs以正己烷溶液配制成DINP浓度为100μg/mL，其他16种PAEs浓度为lO～g/mL的标准储备液；准确移取储备液，配制成系列标准溶液，使DINP的标准曲线工作范围为2.0～100μg/mL，其他PAEs标准曲线工作范围为0.2～10.9μg/mL。
2.2方法
2.2.1样品处理：准确称取粉碎均匀的明胶空心胶囊0.5g（精确至0.1mg），置于10mL具塞玻璃离心管中，加入3mL乙腈，超声提取30min，再用2mL乙腈重复提取一次，合并提取液，定容至5.0mL，待GC/MS测定。空白实验按上述方法进行。
2.2.2气相色谱条件：色谱柱：HP-5MS石英毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm）或相当型号色谱柱；进样口温度：250℃；升温程序：初始柱温60℃，保持1min，以20℃/min升温至220℃，保持1min，再以5℃/min升温至280℃，保持10min；载气：氦气（纯度≥99.999%）；载气流速：1mL/min；进样方式：不分流进样；进样量：1μL。
2.2.3质谱条件：GC/MS接口温度：280℃；离子源温度：230℃；四级杆温度150℃；电离方式：电子轰击源（EI源）；电离能量：70eV；监测方式：选择离子扫描模式（SIM）：监测离子（参见表1）；溶剂延迟5min，17种PAEs标准物质的提取离子色谱图（EIC）见图1。
3结果与讨论
3.1提取溶剂的选择
《食品中邻苯二甲酸酯的测定》GB/T 21911-2008及《食品塑料包装材料中邻苯二甲酸酯的测定》GB/T 21928-2008中塑化剂的提取溶剂为正己烷，因此，除了甲醇、无水乙醇、丙酮等试剂外，本实验还着重比较了正己烷、乙腈、正己烷饱和乙腈等不同提取溶剂对样品中PAEs的提取效果。结果发现，乙腈对明胶空心胶囊的提取效果最佳，明显优于正己烷等溶剂，以DIBP、DBP和DEHP为例，结果如图2，3。
3.2提取方式的选择
实验室常见的提取方式有浸提、超声、震荡和涡旋，因此，本方法分别考察相同时间下，上述提取方式的提取效果。以DIBP和DBP为例，由图4可见，超声方式提取效果最佳，而震荡和浸提效果较差，且震荡和浸提两种提取方式对DBP的提取效果不佳。 3.3提取时间的确定
因超声时间可能影响溶剂对塑化剂的提取效果，特考察了超声10min、20min、30min、40min、50min、60min对塑化剂的提取效果的影响。结果显示超声30min时，提取效果最佳。超声时间延长，提取效果不再明显，反而会产生干扰。
3.4 17种塑化剂的线性方程及最低检出限
将标准储备液用正己烷稀释，使DINP的标准曲线工作范围为2.0～100μg/mL，其他PAEs标准曲线工作范围为0.2～10.0μg/mL，以塑化剂浓度（μg/mL）为横坐标，以相应的峰面积为纵坐标作标准曲线，17种塑化剂的线性回歸方程见表1。
本方法的最低检出限（LOD）为取某一低浓度的标准溶液加入空白明胶空心胶囊中，重复测定6次，以3倍信噪比时PAEs浓度计算出17种PAEs方法最低检出限LOD（mg/kg），计算结果见表1。
3.5精密度与回收率
取0.5g空白明胶空心胶囊样品，分别进行不同浓度的添加，按[2.2.1]方法处理后进行测定。结果显示，方法的平均回收率在86.68%～104.21%范围内，相对标准偏差在2.69～5.11%（n=6）范围内（见表2），该方法的重现性较好，准确度符合要求。
3.6明胶空心胶囊样品的测定
本次共测定市售明胶空心胶囊样品20批次，DEP、DIBP、DBP、DEHP均有不同程度的检出，由监测结果发现，DEP检出最高值为0.63mg/kg，检出率为25%（5120）；DIBP检出最高值为3.23mg/kg，检出率为30%（6/20）；DBP检出最高值为0.66mg/kg，检出率为20%（4/20）；DEHP检出最高值为0.41mg/kg，检出率高达40%（8/20），DINP均未检出。
如果仅以DBP、DEHP、DINP三种邻苯二甲酸酯类化合物作为判定标准的话，监测样品中共有4个产品超出国家标准限制，占明胶空心胶囊样品的20%。说明邻苯二甲酸酯类化合物在明胶空心胶囊中普遍存在，应加强对明胶空心胶囊中塑化剂的监督，特别是对DIBP的监督。
4结论
本方法用乙腈作溶剂，采用超声提取法对明胶空心胶囊中的塑化剂进行提取和GC/MS选择离子监测模式进行测定，建立了明胶空心胶囊中17种塑化剂（包括DINP）的检测方法。实验结果表明，该方法提取效果好，检出限低；处理过程简捷、快速、溶剂用量小；颠覆了传统的正己烷提取系统，为明胶空心胶囊中塑化剂的监测提供技术支持。