目的：白藜芦醇(RSV;3,4’,5-trihydroxystilbene)是一种天然的植物抗毒素，具有抑制肿瘤细胞增殖的作用，并且能够通过诱导肿瘤细胞发生凋亡或自噬进而发挥抗肿瘤作用。多篇报道表明肿瘤抑制基因p53能够调节细胞凋亡和自噬，但由于条件差异p53对细胞凋亡和自噬的作用不同。本实验以人结肠癌细胞株HCT-116p53+/+和HCT-116p53-/-细胞作为研究对象，通过多种实验方法，研究p53在白藜芦醇诱导结肠癌细胞自噬和凋亡过程中的作用，为结肠癌细胞自噬和凋亡机制研究提供新的理论依据。方法：1MTT法检测不同浓度白藜芦醇（0μM，25μM，50μM，100μM，150μM，200μM）作用HCT-116p53+/+和HCT-116p53-/-细胞24h、48h、72h后细胞生存率变化。2单丹磺酰戊二胺（MDC）染色观察不同浓度白藜芦醇（0μM，50μM，100μM，150μM）作用HCT-116p53+/+和HCT-116p53-/-细胞24h、48h、72h后细胞的酸性自噬泡结构和数量变化。3免疫荧光检测不同浓度白藜芦醇（0μM，50μM，100μM，150μM）作用HCT-116p53+/+细胞24h、48h后自噬标志蛋白LC3的表达和分布。44,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染色观察100μM的白藜芦醇作用HCT-116p53+/+和HCT-116p53-/-细胞0h、24h、48h、72h后细胞核变化及凋亡现象。5Western Blot方法检测不同浓度的白藜芦醇（0μM，50μM，100μM，150μM）作用HCT-116p53+/+和HCT-116p53-/-细胞24h、48h、72h及同一浓度（100μM）的白藜芦醇作用HCT-116p53+/+和HCT-116p53-/-细胞0h、24h、48h、72h后自噬相关蛋白Beclin1、LC3和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、C-Beclin1的表达量，分析p53对细胞自噬、凋亡的影响。6用p53激动剂Nutlin-3与白藜芦醇共同处理HCT-116p53+/+细胞24h，Western Blot检测Beclin1、LC3的表达，进一步证实p53与自噬的关系。7Caspase-3试剂盒检测不同浓度的白藜芦醇（0μM，50μM，100μM，150μM）作用HCT-116p53+/+和HCT-116p53-/-细胞48h、72h及同一浓度（100μM）的白藜芦醇作用HCT-116p53+/+和HCT-116p53-/-细胞0h、24h、48h、72h后Caspase-3酶活性，进一步证实p53与凋亡的关系。8白藜芦醇0μM、100μM分别作用HCT-116p53+/+和HCT-116p53-/-细胞24h，以兔（R）IgG和鼠（M）IgG作为阳性对照，Beclin1为沉淀抗体，检测Beclin1与Bcl-2是否相关。9实验数据采用SPSS13.0统计软件分析处理，实验组和对照组比较采用单因素方差分析和t检验，结果以x±SD表示，均以P <0.05为差异具有显著性统计学意义。结果：1白藜芦醇对HCT-116p53+/+和HCT-116p53-/-细胞生存率的影响MTT结果显示，白藜芦醇对HCT-116p53+/+和HCT-116p53-/-细胞均有抑制作用，且对HCT-116p53-/-细胞的抑制更明显。2白藜芦醇对HCT-116p53+/+和HCT-116p53-/-细胞自噬的影响MDC染色结果显示，在白藜芦醇的影响下，HCT-116p53+/+细胞MDC染色阳性细胞自噬泡逐渐增多且增强，自噬明显；HCT-116p53-/-细胞MDC染色阳性细胞自噬泡有逐渐减少且减弱的趋势，自噬现象不明显。免疫荧光结果显示LC3主要定位在HCT-116p53+/+细胞的细胞浆中，LC3荧光强度随着白藜芦醇的浓度增加而升高。Western Blot检测自噬相关蛋白,结果显示HCT-116p53+/+细胞中，Beclin1、LC3Ⅱ的表达均随着白藜芦醇浓度的增加而逐渐增强；Beclin1随白藜芦醇作用时间延长而逐渐增强，LC3Ⅱ在0-48h时随时间的延长表达逐渐增强，在48-72h时随时间的延长LC3Ⅱ的表达减弱。而在HCT-116p53-/-细胞中，Beclin1的表达随白藜芦醇浓度的增加而逐渐降低，随白藜芦醇作用时间的延长而逐渐降低。3p53激动剂Nutlin-3作用下，p53对白藜芦醇诱导细胞自噬的影响Western Blot结果显示，HCT-116p53+/+细胞经Nutlin-3处理后，Beclin1、LC3Ⅱ表达均随p53的增加而增多，MDM2对应表达增多。在Nutlin-3与白藜芦醇共同处理的三者中比较，随p53表达增多，MDM2表达降低；在白藜芦醇处理的三者中比较，随p53表达增多，MDM2表达降低。4白藜芦醇对HCT-116p53+/+和HCT-116p53-/-细胞凋亡的影响DAPI染色结果显示，随着白藜芦醇作用时间的延长，HCT-116p53+/+和HCT-116p53-/-细胞均发生了凋亡，但HCT-116p53-/-细胞发生凋亡的细胞数量和凋亡程度明显大于HCT-116p53+/+细胞。Caspase-3酶活性结果显示，HCT-116p53+/+和HCT-116p53-/-细胞的Caspase-3酶活性均随着白藜芦醇浓度的升高、作用时间的延长而增强，但HCT-116p53-/-细胞Caspase-3酶活性明显强于HCT-116p53+/+细胞。Western Blot检测凋亡相关蛋白,结果显示，在HCT-116p53+/+细胞中，Bax、Bcl-2的表达均随着白藜芦醇浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增强。在HCT-116p53-/-细胞中，N-Beclin1的表达随着白藜芦醇作用时间的延长而逐渐降低，C-Beclin1的表达随着白藜芦醇作用时间的延长而逐渐增强。5Beclin1与Bcl-2的相互作用对白藜芦醇诱导HCT-116p53+/+和HCT-116p53-/-细胞自噬的影响免疫沉淀结果显示，HCT-116p53+/+和HCT-116p53-/-细胞中的Beclin1与Bcl-2相关。结论：1白藜芦醇能诱导HCT-116p53+/+和HCT-116p53-/-细胞自噬与凋亡共存。对于HCT-116p53+/+细胞，白藜芦醇主要通过自噬性细胞死亡的方式抑制其生长；在HCT-116p53-/-，则主要通过诱导凋亡导致细胞死亡。2p53可能在自噬和凋亡的转换调控中发挥重要作用。p53能诱导细胞自噬，延迟凋亡的发生；p53的缺失则由于缺乏诱导自噬的能力，引起HCT-116细胞快速地进入凋亡状态。白藜芦醇有可能作p53突变肿瘤的有效药物。3p53通过调节Beclin1的切割及与Bcl-2的相互作用来调控细胞自噬与凋亡的转换，但具体机制尚不清楚。