【摘 要】
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木聚糖是β-1,4-木糖的聚合物,是自然界中继纤维素之后的第二丰富的多糖。它占农业废料干重的20%-30%。它丰富的储量表明木聚糖酶将在生物转化,造纸制浆等方面有着巨大应用前景。从广西大学农场果园中筛选到一株产木聚糖酶的酵母菌。经过形态学和分子生物学的鉴定,发现该菌属于Dothioraceae座囊菌纲科,Aureobasidium短梗霉属,其18SrDNA序列与Aureobasidiumpullu
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木聚糖是β-1,4-木糖的聚合物,是自然界中继纤维素之后的第二丰富的多糖。它占农业废料干重的20%-30%。它丰富的储量表明木聚糖酶将在生物转化,造纸制浆等方面有着巨大应用前景。从广西大学农场果园中筛选到一株产木聚糖酶的酵母菌。经过形态学和分子生物学的鉴定,发现该菌属于Dothioraceae座囊菌纲科,Aureobasidium短梗霉属,其18SrDNA序列与AureobasidiumpullulansY68具有最高的相似性,初步命名为Aureobasidiumpullulans XYE-7。经研究发现XYE-7合成木聚糖酶的最佳条件为:培养基由0.5%木聚糖、0.5%硫酸铵、0.2%酵母膏、0.1%磷酸二氢钾、0.95%硫酸镁组成,pH值2.0;发酵温度为35℃,培养时间为80h。菌株XYE-7木糖诱导的木聚糖酶粗酶液的酶学性质为:该酶作用的最适温度是70℃,最适pH值为2.5;该酶在60℃以下时稳定性较好,高于60℃时酶活性下降变快;该酶在pH值2.0-5.0时有很好的稳定性,说明木糖诱导的XYE-7木聚糖酶在酸性范围内稳定。它的km值为10.1mg·mL-1。蔗渣木聚糖诱导的木聚糖酶的酶学性质为:该酶作用的最适温度是65℃,最适pH值为7.0;该酶在60℃以下时稳定性较好,60℃保温1h后仍然保留87%的活性,高于60℃时酶活性下降较快;该酶在pH值4.0-9.0时有很好的稳定性,说明XYE-7木聚糖酶有很宽的pH稳定范围。其km值为3.63mg·mL-1。XYE-7菌株制备原生质体的最佳条件为:采用20mL的酵母完全培养基培养菌体18h;预处理的巯基乙醇的浓度为0.25%,EDTA的浓度为0.05mol/L;预处理时间10min;酶液的高渗离子浓度为1.2mol/LMgSO4;纤维素酶和蜗牛酶2%,酶解时间为1.5h。紫外诱变得到酶活提高的菌株作为基因组改组的出发菌株,通过四轮的改组,得到18株酶活提高的菌株,其中一株菌的酶活比改组前出发菌株的酶活提高了50%,比野生型菌株的酶活提高了78%。
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