【摘 要】
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本研究选择两株鸡源益生菌进行体外益生特性检测及其对禽致病大肠杆菌O78在雏鸡消化道内黏附的影响。实验利用不同pH值、胆盐浓度的MRS培养基上益生菌的存活率检测其耐酸、耐
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本研究选择两株鸡源益生菌进行体外益生特性检测及其对禽致病大肠杆菌O78在雏鸡消化道内黏附的影响。实验利用不同pH值、胆盐浓度的MRS培养基上益生菌的存活率检测其耐酸、耐胆盐的能力;用革兰氏染色方法检测益生菌在鸡胚肠黏膜上皮细胞上的黏附能力;利用间接免疫荧光方法体外检测益生菌对禽致病性大肠杆菌在肠黏膜上皮细胞上的黏附抑制能力。根据上述试验结果进行雏鸡体内试验研究。药敏试验方法筛选出对雏鸡肠道菌群敏感的抗生素——头孢哌酮,建立抗生素诱导菌群失调模型,检测益生菌对禽致病大肠杆菌O78在雏鸡消化道黏附的影响,150只无O78感染的1日龄雏鸡随机分为6组,各组处理如下:1组:连续3d灌服头孢哌酮40mg/kg/d,清除肠道菌,第4d口服接种浓度为2×10~9cfu/ml禽致病性大肠杆菌O78 0.5ml。2组:连续3d灌服头孢哌酮40mg/kg/d,清除肠道菌,第4d口服接种浓度为2×10~9cfu/ml禽致病性大肠杆菌O78同时接种等浓度嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌混合液各0.5ml。3组:连续3d灌服灭菌等渗生理盐水0.5ml,第4d口服接种浓度为2×10~9cfu/ml禽致病性大肠杆菌O78 0.5ml。4组:连续3d灌服灭菌等渗生理盐水0.5ml,第4d口服接种浓度为2×10~9cfu/ml禽致病性大肠杆菌O78同时接种等浓度嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌混合液各0.5ml。5组:抗生素处理对照组,只连续3d灌服头孢哌酮40mg/kg/d。6组:空白对照组,只连续3d灌服灭菌等渗生理盐水。利用EMB选择性培养,革兰氏染色,生化鉴定及间接免疫荧光染色等方法对雏鸡嗉囔、腺胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠七个消化道黏膜上黏附的O78进行分离鉴定,利用统计学分析检测益生菌在雏鸡消化道内对禽致病性大肠杆菌的影响。益生菌的益生特性试验结果表明,两株益生菌对不同pH值及胆盐浓度均具有较强的耐受性,二者之间略有差异,其中嗜酸乳杆菌的对pH值和胆盐的耐受力高于干酪乳杆菌;在鸡胚肠黏膜上皮细胞的黏附试验中,两株菌均可粘附在上皮细胞上,干酪乳杆菌在细胞上黏附的菌体数量略高于嗜酸乳杆菌;间接免疫荧光染色方法检测益生菌抑制O78黏附情况的结果显示,禽致病性大肠杆菌黏附于上皮细胞的菌数与对照组比较照组明显减少,而且两种益生菌混合后对O78的抑制效果最为明显,打孔法检测益生菌的抑菌特性与上述结果一致。雏鸡体内的研究结果显示,益生菌可明显抑制禽致病性大肠杆菌O78在消化道内的黏附定植(P<0.05),抗生素处理组和未处理组两雏鸡模型O78黏附的抑制效果比较发现,未处理组雏鸡消化道定植的O78菌数明显低于抗生素处理组,推测外源益生菌对病原菌的生长繁殖具有抑制作用,同时还可促进体内优势菌群生长,提高消化道定植抗力,阻止病原微生物的定植黏附。
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