【摘 要】
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谷氨酰胺(Gln)是动物血液中最丰富的游离氨基酸之一，近年来越来越多的研究发现，Gln除了在维持机体酸碱平衡、调节机体免疫机能以及为组织和细胞的物质和能量代谢提供原料等方面
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谷氨酰胺(Gln)是动物血液中最丰富的游离氨基酸之一，近年来越来越多的研究发现，Gln除了在维持机体酸碱平衡、调节机体免疫机能以及为组织和细胞的物质和能量代谢提供原料等方面都具有重要作用外，还可以诱导细胞热休克蛋白70(Hsp70)的表达。本试验通过给小鼠注射Gln和在胚胎培养液中添加Gln，运用RT-PCR和WesternBlot方法检测小鼠肝脏、子宫、卵巢和早期胚胎中Hsp70表达的变化，研究体内外Gln诱导Hsp70表达的作用。
试验方法:
1.选取8w健康雌性昆明小鼠32只随机分成4组，Ⅰ组为对照组，尾静脉注射生理盐水，试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别尾静脉注射Gln0.15g·kg-1、0.45g·kg-1、0.75g·kg-1，注射后4h处死，取肝脏、子宫和卵巢，采用RT-PCR和WesternBlot法分别检测Hsp70mRNA和Hsp70蛋白表达量。
2.小鼠胚胎在37℃、5％CO2条件下，在CZB培养液中体外培养至四细胞，然后转入含有葡萄糖的CZB培养液中继续培养，转液时进行分组，Ⅰ组为对照组，使用正常葡萄糖-CZB培养液培养，Gln浓度为1mmol·L-1，试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别使用Gln浓度为2mmol·L-1、6mmol·L-1和10mmol·L-1的葡萄糖-CZB培养液培养。注射hCG113h后计算囊胚发育率，161h后计算囊胚孵出率，并且采用WesternBlot法检测各组中囊胚Hsp70蛋白表达量。
试验结果:
1.小鼠注射Gln后4h，试验组Hsp70mRNA和Hsp70蛋白表达量均高于对照组，且表达量随着Gln注射量的增加而增加。Ⅱ组肝脏、子宫和卵巢组织中Hsp70mRNA比对照组分别增加31.82％、40.00％、41.18％，Hsp70蛋白表达量比对照组分别增加9.49％、5.49％、4.84％，两者与对照组比较差异不显著(P＞0.05);Ⅲ组肝脏、子宫和卵巢组织中Hsp70mRNA和Hsp70蛋白表达量比对照组分别增加72.73％、95.00％、135.29％和23.56％、21.10％、14.30％，都显著高于对照组(P＜0.05);Ⅳ组肝脏、子宫和卵巢组织中Hsp70mRNA和Hsp70蛋白表达量比对照组分别增加140.91％、160.00％、247.06％和35.33％、33.94％、33.77％，其中除肝脏Hsp70蛋白表达量显著高于对照组(P＜0.05)外，其余均极显著高于对照组(P＜0.01)。
2.小鼠注射hCG161h后，小鼠囊胚孵出率在对照组为61.88％，试验Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组分别为64.22％、73.21％和76.41％，Ⅱ组与对照组比较差异不显著(P＞0.05)，Ⅲ组和Ⅳ组都显著高于对照组(P＜0.05);对于胚胎Hsp70蛋白表达量，Ⅱ组比Ⅰ组增加0.37％，差异不显著(P＞0.05)，Ⅲ组和Ⅳ组分别比Ⅰ组增加9.13％和16.42％，显著高于Ⅰ组(P＜0.05)，另外，Ⅳ组比Ⅲ组多6.68％，差异显著(P＜0.05)。
结论:
Gln能增加小鼠肝脏、子宫、卵巢组织和囊胚中Hsp70的表达，且Gln对体外培养的小鼠早期胚胎发育有显著促进作用，含有6mmol·L-1和10mmol·L-1Gln的葡萄糖-CZB培养液能显著提高小鼠胚胎孵出囊胚率。
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