研究背景：　　听觉残疾位列残疾之首，其中感音神经性聋（sensorineural hearing loss，SNHL）是导致听觉下降的重要原因，给社会和家庭带来严重负担。外周听觉信号传入听觉中枢需要耳蜗内毛细胞释放兴奋性递质，引起突触后膜产生动作电位，然后才能将信号逐级传入中枢形成听觉。内耳毛细胞的突触病变是感音神经性聋发生的重要病理机制，内毛细胞突触间有高效的囊泡回收机制使得神经递质不间断的、有效的释放。在众多囊泡回收机制中，网格蛋白介导的内吞（clathrin mediated endocytosis，CME）起主要作用，其中发动蛋白（Dynamin）是维持突触囊泡内吞的关键蛋白，在网格蛋白介导的内吞过程中起剪切囊泡颈的作用，将网格蛋白包被小泡与质膜分离。虽然Dyanmin蛋白在内吞过程中发挥着重要作用，但其调控机制并不清楚。　　小分子RNA（miRNA）是一类长约23个核苷酸左右的小非编码RNA，通过完全互补配对或者部分配对与特定靶基因的mRNA 3UTR结合，直接降解或抑制靶基因的mRNA，在转录后水平调节基因表达。越来越多的研究表明 miRNA 在内耳发育、听功能的维持及感音神经性聋的发生发展过程中具有重要作用。耳蜗在遭受各种“压力”包括逐步发生老龄化的过程中，miRNA的表达发生变化，这些变化最终导致细胞死亡和感音神经性聋的发生。　　实验方法：　　1、取正常 C57小鼠耳蜗基底膜行原位杂交，检测 miR-30b在小鼠耳蜗内毛细胞表达定位，明确miR-30b在耳蜗内毛细胞内有表达；　　2、通过双荧光素酶报告基因检测验证miR-30b和DNM1基因（Dynamin蛋白）的靶向结合作用；　　3、耳蜗圆窗注射过表达miR-30b的腺相关病毒；　　4、实时荧光定量PCR检测miR-30b和DNM1基因的表达，免疫印迹实验（Western blot）检测Dynamin蛋白表达；　　5、免疫荧光染色观察小鼠耳蜗内毛细胞Dynamin蛋白表达分布；　　6、听性脑干反应（ABR）检测小鼠听力阈值的变化。　　实验结果：　　1、原位杂交结果显示miR-30b在小鼠耳蜗内、外毛细胞胞质胞核均有表达。　　2、双荧光素酶报告基因检测验证miR-30b对DNM1基因有靶向抑制。　　3、荧光显微镜显示基底膜成功转染上过表达miR-30b的腺相关病毒。　　4、过表达miR-30b后RT-PCR和WB检测DNM1和Dynamin蛋白表达减少。　　5、过表达miR-30b后，Dynamin蛋白在内毛细胞细胞质周围分布减少。　　6、过表达miR-30b后ABR检测小鼠听力阈值提高。　　7、miR-30b表达量随着小鼠年龄增加而增加，Dyanmin蛋白表达量随着小鼠年龄增加而减少。　　结论：　　通过基底膜原位杂交确定miR-30b在基底膜毛细胞的表达定位，双荧光素酶报告基因验证DNM1是miR-30b的靶基因，通过耳蜗圆窗显微注射过表达miR-30b的腺相关病毒成功转染基底膜毛细胞。我们发现过表达miR-30b可以靶向下调DNM1基因从而抑制Dynamin蛋白的表达。随着小鼠年龄的增加耳蜗中miR-30b的表达水平逐渐升高，提示了年龄相关性耳聋可能与 Dynamin 蛋白相关，即随着年龄的增长Dynamin 蛋白表达减少，导致小鼠听力阈值提高。通过研究 miRNA 可能会为音神经性聋治疗提供一个新的靶点。