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本课题以0—14日龄自然哺喂乳鸽为试验对象,随机选取3日龄、8日龄、14日龄体重相近、健康的雄乳鸽各6羽,称重,屠宰取样。测定血清中相关生化指标、激素水平;分析鸽乳中常规营养成分、氨基酸、免疫球蛋白水平及主要消化酶活性;小肠和胰腺中主要消化酶活性,进而研究了胰腺中胰蛋白酶原基因相对表达量,探讨乳鸽消化道及消化酶发育规律。
血清常规生化指标测定结果表明:14日龄乳鸽血清中总蛋白含量比3日龄和8日龄分别低3.97%(P>0.05)和13.06%(P<<0.05);8日龄乳鸽血清中钙含量比3日龄和14日龄分别低10.19%(P<0.05)和12.62%(P<0.05);3日龄乳鸽血清中磷含量比8日龄和14日龄分别高57.84%(P<0.05)和59.02%(P<0.05)。血清中白蛋白和尿酸含量在各日龄间无显著差异(P<0.05)。
血清激素水平测定结果表明:14日龄乳鸽血清中T3含量比3日龄和8日龄分别高86.45%(P<0.05)和12.36%(P<0.05);3日龄乳鸽血清中胃泌素含量比8日龄和14日龄分别高15.78%(P>0.05)和303.03%(P<0.05)。血清中T4含量在各日龄间差异不显著(P>0.05)。
鸽乳中各种指标的测定结果表明:(1)鸽乳中免疫球蛋白3日龄鸽乳中IgA的含量比8日龄和14日龄分别高30%(P<0.05)和71.05%(P<0.05);14日龄鸽乳中IgG含量比3日龄和8日龄分别高1.3%(P<0.05)和0.96%(P<0.05);3日龄鸽乳中IgM含量比8日龄和14日龄分别高29.29%(P<0.05)和112.94%(P<0.05)。(2)鸽乳中常规营养3日龄鸽乳中粗蛋白、粗脂肪的含量比8日龄和14日龄分别高111.93%(P<0.05)、135.17%(P<0.05)和256.19%(P<0.05)、340.79%(P<0.05);3日龄鸽乳中粗灰分含量比8日龄和14日龄分别高14.59%(P<0.05)和96.37%(P<0.05)。各日龄鸽乳中水分含量差异不显著(P>0.05)。(3)鸽乳中氨基酸含量共测出了17种氨基酸,3日龄鸽乳中各种氨基酸含量均明显高于8日龄和14日龄鸽乳中氨基酸含量。其中3日龄、8日龄、14日龄鸽乳中必需氨基酸含量占总氨基酸的比例分别为68.13%、64.07%和63.67%,蛋氨酸占必需氨基酸的比例分别为4.28%、3.54%和3.71%。3日龄、8日龄、14日龄鸽乳中酸性氨基酸天冬氨酸和谷氨酸的含量占总氨基酸的比例分别为22.91%、24.94%和25.56%。(4)鸽乳中主要消化酶活性鸽乳中3日龄鸽乳中淀粉酶活性比8日龄和14日龄分别高225.32%(P<0.05)和362.20%(P<0.05);8日龄鸽乳中脂肪酶活性比3日龄14日龄分别高110.51%(P<0.05)和66.69%(P<0.05):总蛋白水解酶活性14日龄鸽乳中最低,分别比3日龄和8日龄低50%(P<0.05)和55.04%(P<0.05);胰蛋白酶和糜蛋白酶活性随着日龄增加而升高,8日龄和14日龄时胰蛋白酶和糜蛋白酶活性比3日龄分别高242.51%(P<0.05)、344.08%(P<0.05)和960%(P<0.05)、1393.66%(P<0.05)。
小肠中主要消化酶活性测定结果表明:(1)十二指肠中主要消化酶活性脂肪酶活性3日龄时最高,比8日龄和14日龄分别高90.75%(P<0.05)和67.48%(P<0.05);8日龄和14日龄时总蛋白水解酶活性比3日龄分别高204.72%(P<0.05)和195.15%(P<0.05);胰蛋白酶和糜蛋白酶活性也随着日龄增加而升高,14日龄时胰蛋白酶、糜蛋白酶活性分别比3日龄和8日龄时高118.30%(P<0.05)、58.94%(P>0.05)和33.19%(P>0.05)、68.94%(P<0.05)。淀粉酶活性各日龄间差异不显著。(2)空肠中主要消化酶活性3日龄空肠中脂肪酶活性比8日龄和14日龄时分别高93.65%(P<0.05)和75.30%(P<0.05);胰蛋白酶和糜蛋白酶活性以8日龄时最高,比3日龄和14日龄时分别高132.79%(P<0.05)、363.83%(P<0.05)和26.67%(P>0.05)、71.16%(P<0.05);淀粉酶和总蛋白水解酶活性各日龄间差异不显著(P>0.05)。
胰腺中主要消化酶活性测定结果表明:3日龄胰腺中脂肪酶活性比8日龄和14日龄时分别高157.61%(P<0.05)和163.34%(P<0.05);3日龄胰腺中胰蛋白酶、糜蛋白酶活性比8日龄和14日龄时分别高21.33%(P>0.05)、43.28%(P<0.05)和44.93%(P<0.05)、34.26%(P>0.05);胰腺中淀粉酶和总蛋白水解酶活性各日龄间差异不显著(P>0.05)。
对胰蛋白酶原基因和18S rRNA基因进行了克隆测序,试验结果如下:胰蛋白酶原cDNA阳性克隆子测序后得到422bp的核苷酸序列。对获得的鸽胰蛋白酶原cDNA部分核苷酸序列(Genbank登录号为DQ503466)与已报道的鸡、鸵鸟和褐家鼠等的胰蛋白酶原cDNA序列比较,发现胰蛋白酶原cDNA具有高度保守性,所比较的氨基酸序列的同源性也较高。
18S rRNA cDNA阳性克隆子测序后得到193bp的核苷酸序列。对克隆得到的鸽的18S rRNA核苷酸序列与己报道的鸽、鸡、鸭和白鸥等18S rRNA序列相比较,发现18S rRNA具有高度保守性,所比较的氨基酸序列的同源性也较高。
采用RT—PCR方法研究了鸽胰腺中胰蛋白酶原基因表达量的变化。研究结果表明:14日龄时胰蛋白酶原基因表达量比3日龄和8日龄分别高14.71%(P>0.05)和77.27%(P<0.05),而8日龄时胰蛋白酶原基因表达量比3日龄下降了54.55%(P<0.05)。
本研究揭示:鸽乳中常规营养成分粗蛋白、粗脂肪和粗灰分的含量随着日龄增加下降,碳水化合物的量呈上升趋势;氨基酸分析表明:必需氨基酸占总氨基酸的比例基本稳定。乳鸽十二指肠内容物中总蛋白水解酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶活性随乳鸽日龄增加呈上升趋势,脂肪酶活性呈下降趋势。乳鸽空肠内容物中胰蛋白酶活性随日龄增加先上升后下降,脂肪酶、糜蛋白酶活性呈下降趋势。乳鸽胰腺中脂肪酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶活性随乳鸽日龄增加呈下降趋势。
克隆得到的鸽胰蛋白酶原(Genbank登录号DQ503466)cDNA和18S rRNAcDNA部分核苷酸序列与鸡、鸭等物种的核苷酸序列具有很高的同源性,在生物进化上具有很近的亲缘关系。0—14日龄乳鸽胰腺中胰蛋白酶原基因表达量随日龄增加先下降后上升。