中药芪葵颗粒对糖尿病肾病肾纤维化的干预作用的实验研究

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目的:本研究通过细胞实验及动物模型来研究芪葵颗粒对糖尿病肾病相关纤维化因子-纤维连接素(Fibronectin, FN)表达的影响;探讨运用芪葵颗粒是否可以减轻和延缓糖尿病肾病的发生与进展,为糖尿病肾病的预防和治疗提供新思路。方法:1.动物实验:SD大鼠36只随机分为四组,高剂量芪葵颗粒组(A组)10只、低剂量芪葵颗粒组(B组)10只、模型对照组(C组)10只和空白对照组(D组)6只。高糖高脂饮食诱导后,一次性注射链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)建立2型糖尿病模型。模型建立后,固定时间常规方法灌胃。高剂量组予高剂量芪葵颗粒浸膏灌胃,低剂量组予低计量芪葵颗粒浸膏灌胃,模型对照组与空白组以3m1生理盐水灌胃。分别于注射STZ后12周、16周、20周、24周将大鼠称重后用代谢笼留取24h尿检测尿白蛋白、尿肌酐、尿蛋白定量。第24周时统一处死:颈动脉取血,分离血清,灭活后测定血糖、血肌酐、尿素氮、甘油三酯;切取肾脏,称取重量,测量肾脏大小,用于光镜观察和FN免疫组化的检测。2.细胞实验:常规方法制备芪葵颗粒含药血清,SD大鼠25只随机分为高剂量芪葵颗粒含药血清组10只、低剂量芪葵颗粒含药血清组10只,对照组5只。常规方法灌胃7天后统一处死,颈动脉取血,离心分离血清,灭活后无菌过滤。放入-70℃冰箱保存备用。取人肾系膜细胞(Human renal mesangial cells, HRMC)将细胞分成三个大组分别刺激24h,收取细胞。Western-blot检测FN表达;反转录-多聚酶链反应(Reverse transcription polymerse chain reaction, RT-PCR)检测FN mRNA表达。结果:1.动物实验(1)HE染色结果可见,同空白对照组比较,模型对照组大鼠肾小球体积增大,系膜细胞增生明显,系膜区增宽,肾小球肥大,基底膜增厚,基质增多。同模型组比较,高剂量组及低剂量组大鼠均未见明显的系膜细胞增生,但两组之间差异不大。(2)同空白对照组大鼠比较,模型对照组肾重/体重(24周时)、24h尿白蛋白定量(12周、16周、20周时、24周)明显增高。同模型组比较,高剂量组肾重/体重(24周时)、24h尿白蛋白定量(12周、16周、20周、24周)均明显低于模型对照组。低剂量组肾重/体重(24周时)、24h尿白蛋白定量(12周、16周、20周、24周)也均低于模型对照组,但较高剂量组不明显。(3)免疫组化结果显示同空白对照组比较,模型组及给药组FN表达在细胞基质及基底膜明显增加。给药组组较模型对照组程度较轻。2.FN在高糖刺激的HRMC细胞中的表达(1)单独高糖干预后的人肾系膜细胞内FN mRNA表达明显升高。(2)同模型组比较芪葵颗粒干预后高糖刺激后的人肾系膜细胞FN mRNA表达减少,10%含药血清干预较20%含药血清干预作用明显。结论:1.芪葵颗粒对STZ诱导糖尿病大鼠的肾脏纤维化有一定的预防作用,可以减少其蛋白尿,延缓肾脏纤维化的进展。2.芪葵颗粒含药血清对高糖刺激后的人肾系膜细胞FN mRNA和FN的表达有一定的抑制。3.通过体内及体外两方面证明芪葵颗粒可以减轻肾脏的纤维化程度,延缓其发展,对糖尿病肾病有一定的预防作用。
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