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帕金森病(PD)是一种常见运动障碍性疾病，在中老年人中高发。目前PD的治疗方法与效果有限，尚未有根治的方法。随着我国乃至全球人口老龄化日趋严重，PD严重威胁人们的健康和生活质量。迄今为止，虽然已大量的研究表明帕金森的发病与自噬的异常有关，但是其具体机制尚未完全清楚。酪氨酸激酶c-Abl和糖原合成激酶GSK3β在细胞中调控着多种信号通路的信号转导，影响多种细胞活动的进程。在体内外PD模型和PD患者脑标本中均有发现，酪氨酸激酶c-Abl和糖原合成蛋白GSK3β的活性异常增加。另外，有研究发现在PD模型中c-Abl与自噬的异常相关，但是二者间存在何种具体联系尚不清楚。也有研究报道GSK3β可以调控TFEB（调控大多数自噬和溶酶体相关基因的转录因子），影响阿茨海默病和胰腺癌的进程，但是在PD尚未有报道。而在AD模型中，干扰c-Abl可影响GSK3β的活性，但没有更多的研究探讨它们的关系。因此阐明在PD中GSK3β、c-Abl与自噬相互之间的联系以及机制具有重要的意义，为帕金森病的防治和治疗药物的开发提供理论基础和新的思路。 目的： 1.探索Mpp+诱导神经元死亡和抑制自噬的的机制; 2.明确c-Abl是否参与Mpp+导致的神经元自噬抑制及其机制; 3.明确c-Abl是否参与Mpp+导致的GSK3β-Y216的磷酸化; 4.明确GSK3β是否参与Mpp+导致的神经元自噬抑制及其机制。 方法： 1、CCK-8检测SN4741细胞活力 2、蛋白免疫印迹法检测细胞内蛋白的表达 3、PCR、琼脂糖珠凝胶电泳法检测细胞内基因的转录水平 4、免疫共沉淀法(Co-IP)检测细胞内蛋白与蛋白间的相互作用 5、细胞核蛋白提取方法、免疫荧光法检测蛋白在细胞内的分布 6、质粒的转化、质粒的转染、siRNA干扰序列的转染 7、Lysotracker染料标记细胞内溶酶体 结果： 1.MPP+导致SN4741细胞活力下降，核内TFEB减少，抑制自噬和溶酶体生成; 2.MPP+可激活c-Abl，使用c-Abl抑制剂可恢复核内TFEB水平，并恢复自噬和溶酶体生成; 3.MPP+导致GSK3β-Y216磷酸化，激活GSK3β，使用c-Abl抑制剂可减少GSK3β-Y216磷酸化; 4.c-Abl激动剂可使GSK3β-Y216磷酸化; 5.c-Abl与GSK3β可相互结合，Mpp+可导致二者结合增加; 6.MPP+处理下，GSK3β与HSP90的结合没有增加; 7.MPP+处理下，使用GSK3β抑制剂或者siRNA干扰GSK3β可恢复核内TFEB水平，并恢复自噬和溶酶体生成; 8.使用GSK3β/c-Abl抑制剂可恢复Mpp+导致的细胞活力下降，使用CQ抑制溶酶体途径或者干扰TFEB可使GSK3β/c-Abl抑制剂对细胞的保护作用丧失。 结论： 1.MPP+通过抑制TFEB介导自噬和溶酶体生成而导致神经元死亡; 2.MPP+模型下，激活的c-Abl抑制TFEB介导的自噬和溶酶体生成; 3.MPP+模型下，激活的c-Abl可磷酸化GSK3β-Y216，激活GSK3β; 4.HSP90介导的GSK3β自磷酸化并不参与Mpp+导致的GSK3β-Y216磷酸化; 5.MPP+模型下，激活的GSK3β通过抑制TFEB介导的自噬和溶酶体生成，最终影响神经元存活。