【摘 要】
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脑立体定位注射AAV病毒载体是神经科学研究领域中常用的技术手段,目前相关研究多聚焦在AAV病毒载体介导的转基因/基因编辑效果。然而,AAV病毒具有一定的免疫原性,可能会给宿主组织带来损害,立体定位注射操作本身也会造成物理损伤。如何控制这些损伤,降低对研究和临床转化的影响,同时达到理想的注射位点病毒感染体积尚未见系统的研究报道。本研究中,我们使用脑立体定位注射的方法,采用100n L/min、200
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脑立体定位注射AAV病毒载体是神经科学研究领域中常用的技术手段,目前相关研究多聚焦在AAV病毒载体介导的转基因/基因编辑效果。然而,AAV病毒具有一定的免疫原性,可能会给宿主组织带来损害,立体定位注射操作本身也会造成物理损伤。如何控制这些损伤,降低对研究和临床转化的影响,同时达到理想的注射位点病毒感染体积尚未见系统的研究报道。本研究中,我们使用脑立体定位注射的方法,采用100n L/min、200n L/min和300n L/min三种不同的注射速度在C57小鼠纹状体注射AAV2/9-EGFP病毒或PBS,注射21天后,用CUBIC法对鼠全脑进行透明化处理,然后利用光片扫描（lightsheet）技术对病毒感染体积进行测量。同时,使用免疫荧光染色的方法对注射动物的胶质细胞应激反应情况进行检测,最后使用western blot方法对胶质细胞应激反应的情况进行印证。结果发现,CUBIC处理可使鼠脑发生40%的膨胀,100n L/min注射速度组获得的感染体积显著大于其他两个速度组。注射PBS也会引起胶质细胞的应激反应,但注射AAV2/9-EGFP可导致略高于PBS组的胶质细胞应激。100n L/min注射速度组胶质细胞的应激反应显著弱于其他两个速度组。胶质细胞的应激表现为星形胶质细胞的增生但形态不发生显著变化,而小胶质细胞的形态显著发生改变而未发生增殖。综上,AAV2/9病毒本身不会引起显著的胶质细胞应激反应,注射速度是脑立体定位注射中应考虑的一个重要因素,低速注射可获得最大的AAV感染体积,同时导致的胶质细胞应激反应最弱。手术条件允许的情况下应选择低速注射。病毒制备工艺改善或可降低AAV导致的胶质细胞应激反应。
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