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目的：
1.研究多柔比星对大鼠离体胸主动脉及颈总动脉环的作用及其机制。
2.研究多柔比星慢性给药对在体大鼠胸主动脉的作用及机制。
方法：
1.采用离体血管环恒温灌流系统，通过累积加药法每10min加入多柔比星（doxorubicin,DOX）1次使其终浓度递增为1、3、10、30和100μmol?L-1，观察其对基础状态、苯肾上腺素（PE,1μmol?L-1）和氯化钾（KCl,60mmol?L-1）预收缩的胸主动脉及颈总动脉环的作用，并采用多种拮抗剂、激动剂探讨其对血管作用的可能机制。
2.采用离体血管环恒温灌流系统，PE（1μmol?L-1）预收缩大鼠胸主动脉后，采用DOX（100μmol?L-1）舒张血管（大约90min），收集血管环组织，WesternBlot检测其组织中蛋白激酶C（PKC）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达情况。
3.将SD大鼠随机分成生理盐水对照组（n=8，等体积生理盐水，ip）和DOX给药组（n=15，2mg/kg，ip）。每三天给药一次，共6次，累积剂量为12mg/kg。末次给药结束一周后，采用尾动脉无创血压仪测量尾动脉收缩压（SBP）、舒张压（DBP）；检测血清中去甲肾上腺素（NE）、糖皮质激素（glucocorticoid）、活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、8-羟基脱氧鸟苷酸（8-OhdG）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活力；检测大鼠血清和胸主动脉中一氧化氮（NO）含量；采用离体血管环恒温灌流系统测定大鼠胸主动脉的血管反应性；HE、masson染色观察大鼠胸主动脉组织形态及纤维化程度；WesternBlot、免疫组织化学法检测大鼠胸主动脉中PKC、iNOS和eNOS蛋白表达情况。
结果：
1.累积浓度DOX（1、3、10、30和100μmol?L-1）对基础状态下及KCl预收缩的大鼠胸主动脉及颈总动脉环张力无明显影响，但可浓度依赖性的舒张PE预收缩的内皮完整大鼠胸主动脉及颈总动脉环（P＜0.05），且其对去内皮胸主动脉环也有舒张作用，但舒张程度弱于内皮完整组（P＜0.05）。
2.环氧合酶抑制剂吲哚美辛（Indo,0.01mmol?L-1）、ATP敏感性钾通道抑制剂格列苯脲（Gli,0.01mmol?L-1）及β受体阻断剂普萘洛尔（0.01mmol?L-1）对DOX舒血管作用无明显影响；一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME,0.1mmol?L-1）、电压依赖性钾通道（Kv）抑制剂4-氨基吡啶（4-AP,1mmol?L-1）、钙敏感性钾通道（KCa）抑制剂四乙胺（TEA,1mmol?L-1）及内向整流型钾通道（KIR）抑制剂BaCl2（1mmol?L-1）均可明显抑制DOX的舒血管作用（P＜0.05）。
3.DOX（1、10和100μmol?L-1）可浓度依赖性地减弱无钙液中PE诱发的血管收缩，并可使氯化钙量效曲线右移。
4.PKC激动剂佛波醇酯PMA（0.1μmol?L-1）可部分抑制DOX的舒血管作用（P＜0.05），而PKC抑制剂星孢菌素SP（0.01μmol?L-1）孵育血管后，DOX舒血管作用增强（P＜0.05）。
5.DOX预孵后大鼠离体胸主动脉血管组织中PKC蛋白水平降低（P＜0.01），eNOS蛋白水平增加（P＜0.01），iNOS蛋白水平无明显变化；PKC激动剂可使DOX组PKC蛋白水平增加（P＜0.05），eNOS蛋白水平下降（P＜0.01），iNOS蛋白水平没有发生改变；PKC抑制剂预孵后，DOX组PKC、eNOS及iNOS蛋白水平无明显变化。
6.DOX慢性给药可降低大鼠尾动脉收缩压、舒张压和胸主动脉血管反应性。
7.DOX慢性给药可使大鼠血清NE、glucocorticoid、MDA、ROS和8-OhdG含量升高（P＜0.05），血清SOD活力降低（P＜0.01），血清和胸主动脉组织中NO含量均升高（P＜0.01）。
8.HE染色结果显示，DOX慢性给药可使胸主动脉内膜不平整，出现褶皱增厚，内皮细胞脱落。中膜增厚，部分平滑肌细胞核不再呈规则椭圆形，且圆形细胞核轻度增多；Masson染色结果显示，DOX可使大鼠胸主动脉发生纤维化。
9.DOX慢性给药可使大鼠胸主动脉血管组织中PKC、eNOS蛋白水平降低，iNOS蛋白水平增加（P＜0.05）。
结论：
1.DOX可浓度依赖性地舒张大鼠离体胸主动脉及颈总动脉环，其舒血管机制可能与促进NO释放、激活KV、KCa和KIR、抑制内钙释放及外钙内流有关。
2.DOX急性给药可通过PKC-eNOS-NO通路介导大鼠离体血管舒张。
3.DOX慢性给药可通过PKC-iNOS-NO通路介导胸主动脉血管低反应性，且刺激大鼠胸主动脉内皮损伤、纤维化和中膜增厚，其机制可能与抑制PKC促进NO生成增多引起的氧化应激反应增强相关。
1.研究多柔比星对大鼠离体胸主动脉及颈总动脉环的作用及其机制。
2.研究多柔比星慢性给药对在体大鼠胸主动脉的作用及机制。
方法：
1.采用离体血管环恒温灌流系统，通过累积加药法每10min加入多柔比星（doxorubicin,DOX）1次使其终浓度递增为1、3、10、30和100μmol?L-1，观察其对基础状态、苯肾上腺素（PE,1μmol?L-1）和氯化钾（KCl,60mmol?L-1）预收缩的胸主动脉及颈总动脉环的作用，并采用多种拮抗剂、激动剂探讨其对血管作用的可能机制。
2.采用离体血管环恒温灌流系统，PE（1μmol?L-1）预收缩大鼠胸主动脉后，采用DOX（100μmol?L-1）舒张血管（大约90min），收集血管环组织，WesternBlot检测其组织中蛋白激酶C（PKC）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达情况。
3.将SD大鼠随机分成生理盐水对照组（n=8，等体积生理盐水，ip）和DOX给药组（n=15，2mg/kg，ip）。每三天给药一次，共6次，累积剂量为12mg/kg。末次给药结束一周后，采用尾动脉无创血压仪测量尾动脉收缩压（SBP）、舒张压（DBP）；检测血清中去甲肾上腺素（NE）、糖皮质激素（glucocorticoid）、活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、8-羟基脱氧鸟苷酸（8-OhdG）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活力；检测大鼠血清和胸主动脉中一氧化氮（NO）含量；采用离体血管环恒温灌流系统测定大鼠胸主动脉的血管反应性；HE、masson染色观察大鼠胸主动脉组织形态及纤维化程度；WesternBlot、免疫组织化学法检测大鼠胸主动脉中PKC、iNOS和eNOS蛋白表达情况。
结果：
1.累积浓度DOX（1、3、10、30和100μmol?L-1）对基础状态下及KCl预收缩的大鼠胸主动脉及颈总动脉环张力无明显影响，但可浓度依赖性的舒张PE预收缩的内皮完整大鼠胸主动脉及颈总动脉环（P＜0.05），且其对去内皮胸主动脉环也有舒张作用，但舒张程度弱于内皮完整组（P＜0.05）。
2.环氧合酶抑制剂吲哚美辛（Indo,0.01mmol?L-1）、ATP敏感性钾通道抑制剂格列苯脲（Gli,0.01mmol?L-1）及β受体阻断剂普萘洛尔（0.01mmol?L-1）对DOX舒血管作用无明显影响；一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME,0.1mmol?L-1）、电压依赖性钾通道（Kv）抑制剂4-氨基吡啶（4-AP,1mmol?L-1）、钙敏感性钾通道（KCa）抑制剂四乙胺（TEA,1mmol?L-1）及内向整流型钾通道（KIR）抑制剂BaCl2（1mmol?L-1）均可明显抑制DOX的舒血管作用（P＜0.05）。
3.DOX（1、10和100μmol?L-1）可浓度依赖性地减弱无钙液中PE诱发的血管收缩，并可使氯化钙量效曲线右移。
4.PKC激动剂佛波醇酯PMA（0.1μmol?L-1）可部分抑制DOX的舒血管作用（P＜0.05），而PKC抑制剂星孢菌素SP（0.01μmol?L-1）孵育血管后，DOX舒血管作用增强（P＜0.05）。
5.DOX预孵后大鼠离体胸主动脉血管组织中PKC蛋白水平降低（P＜0.01），eNOS蛋白水平增加（P＜0.01），iNOS蛋白水平无明显变化；PKC激动剂可使DOX组PKC蛋白水平增加（P＜0.05），eNOS蛋白水平下降（P＜0.01），iNOS蛋白水平没有发生改变；PKC抑制剂预孵后，DOX组PKC、eNOS及iNOS蛋白水平无明显变化。
6.DOX慢性给药可降低大鼠尾动脉收缩压、舒张压和胸主动脉血管反应性。
7.DOX慢性给药可使大鼠血清NE、glucocorticoid、MDA、ROS和8-OhdG含量升高（P＜0.05），血清SOD活力降低（P＜0.01），血清和胸主动脉组织中NO含量均升高（P＜0.01）。
8.HE染色结果显示，DOX慢性给药可使胸主动脉内膜不平整，出现褶皱增厚，内皮细胞脱落。中膜增厚，部分平滑肌细胞核不再呈规则椭圆形，且圆形细胞核轻度增多；Masson染色结果显示，DOX可使大鼠胸主动脉发生纤维化。
9.DOX慢性给药可使大鼠胸主动脉血管组织中PKC、eNOS蛋白水平降低，iNOS蛋白水平增加（P＜0.05）。
结论：
1.DOX可浓度依赖性地舒张大鼠离体胸主动脉及颈总动脉环，其舒血管机制可能与促进NO释放、激活KV、KCa和KIR、抑制内钙释放及外钙内流有关。
2.DOX急性给药可通过PKC-eNOS-NO通路介导大鼠离体血管舒张。
3.DOX慢性给药可通过PKC-iNOS-NO通路介导胸主动脉血管低反应性，且刺激大鼠胸主动脉内皮损伤、纤维化和中膜增厚，其机制可能与抑制PKC促进NO生成增多引起的氧化应激反应增强相关。