鸭病毒性肝炎(Duck viral hepatitis, DVH)是由鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus, DHV引起的一种高致死率的传染病,主要感染21日龄以内的雏鸭,引起典型的肝炎症状,雏鸭死亡率高达80%以上且传播迅速,给养禽业生产造成了极大的损失。在鸭肝炎病毒感染的检测与诊断方面,主要采用病毒分离、病毒中和试验以及病毒核酸检测等方法,虽各有优点,但耗时较长,无法满足大批量检测的需求。因此,本研究选择我国流行株DHAV-1的结构蛋白VP1进行了克隆和原核表达,以纯化后的VP1蛋白作为检测抗原,建立了针对鸭甲肝病毒1型血清抗体的间接方法和化学发光酶ELISA免疫分析快速检测方法。(CLEIA)’1.鸭甲肝病毒1型VP 1基因的克隆与表达本研究利用技术,以RT-PCR为模板,扩增出VP1基因,DHAV-1 RNA基因片段长714bp。构建了重组表达质粒和pET-28a-VP1并pET-32a-VP1,摸索其表达条件：将重组表达质粒和pET-28a-VP1分别转化pET-32a-VP1到大肠杆菌表达菌株中,选用不同的Rosetta(DE3)浓度和诱导时间,IPTG进行重组蛋白的诱导表达,表达产物经电泳分析鉴定。结果表SDS-PAGE明：VP1基因在和pET-28a均获得表达,表达的重组蛋白大小分别pET-32a为：本研究选择表达量较高的27 kDa、47 kDa。原核表达质粒,pET-32a-VP1利用Ni-NTA亲和层析对VP1重组蛋白进行纯化,SDS-PAGE电泳结果显示纯度达到95%以上,可用作检测抗原。2.鸭甲肝病毒1型抗体检测间接ELISA和CLEIA方法的建立建立的间接ELISA方法和CLEIA方法,特异性均为100%；板内重复性实验的变异系数分别为：1.16%-4.8%、2.27%-2.55%；板间重复性实验的变异系数分别为：2.29%-8.6%、2.18%-4.33%；说明这两种方法具有较高的特异性和稳定性,且CLEIA方法灵敏度和重复性优于间接ELISA方法,为DHAV-1的诊断提供一种良好的检测方法。