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慢性肾脏病（CKD）的患病率与死亡率在国内外逐年上升,已成为一个世界性的常见慢性疾病,严重威胁着人们的健康。心血管疾病（CVD）是CKD、终末期肾脏病（ESRD）患者最常见的并发症及最主要的死亡原因,而血管钙化（VC）是CVD和心血管死亡的独立危险因素之一。在高磷等因素作用下,VSMCs发生成骨样表型转化,平滑肌细胞特异性的生物标志物表达减少,而成骨细胞生物标志物的表达明显增加,最终发生血管钙化。目前许多研究发现miRNAs的表达能调节VSMCs转分化为成骨样或破骨样表型,而在这个过程中Runx2发挥着重要作用。miR-205是miRNAs家族成员之一,有研究表明miR-205在血管钙化方面有调控作用。Runx2是runt家族成员之一,参与人体多种生理过程,有实验研究表明Runx2在骨形成、软骨形成、骨代谢相关方面有着重要作用。Runx2在正常的血管中不表达,但在CKD患者的动脉中表达,提示Runx2在CKD相关的血管钙化中发挥重要作用。鉴于此,我们拟探讨miR-205在高磷诱导的大鼠平滑肌细胞钙化中的作用,并探讨循环血清miR-205在CKD患者血管钙化中的诊断价值,旨在发现与CKD患者血管钙化密切相关的miRNAs及其作用机制,为探究其是否可应用于临床诊断及治疗提供参考。第一部分miR-205靶向Runx2在高磷诱导的大鼠血管钙化中的研究目的:探讨miR-205在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化中的作用,发现miR-205调控血管钙化的机制。方法:使用高磷培养基刺激大鼠胸主动脉VSMCs 7、14天建立钙化模型。采用q RT-PCR和Western Blot检测高磷诱导VSMCs钙化模型中miR-205和相关蛋白的相对表达水平。通过细胞转染,上调或下调miR-205,验证miR-205对Runx2及VSMCs钙化的影响。再行双荧光素酶实验验证miR-205与Runx2的靶向关系。结果:1.与正常对照组相比,随着高磷刺激时间的延长,VSMCs中茜素红S染色出现明显的红色钙盐沉积;钙含量、ALP活性显著增加;α-SMA、SM22α蛋白水平显著降低,Runx2蛋白水平显著升高;2.q RT-PCR结果显示,在高磷诱导的VSMCs钙化模型中,随着诱导时间的延长,miR-205表达水平显著降低;3.细胞转染结果显示,转染miR-205 mimic时,茜素红钙盐沉积、钙含量及ALP活性显著降低。Western blot结果显示,α-SMA、SM22α的表达水平显著升高,Runx2的表达水平显著降低,而转染miR-205 inhibitor时上述结果相反;4.双荧光素酶报告基因结果显示:miR-205 mimic与Runx2 3’-UTR-WT共转染的细胞中,荧光素酶相对活性显著下降,表明miR-205直接抑制Runx2的表达。结论:高磷可诱导VSMCs钙化,其机制可能是高磷抑制VSMCs中miR-205的表达,使Runx2的表达增加,从而诱导VSMCs成骨样表型转化,促进VSMCs钙化的发生。第二部分循环血清miR-205在慢性肾脏病患者血管钙化中的诊断价值目的:探究血清miR-205在CKD血管钙化患者中的表达及诊断价值。方法:选择2020年6月至2021年1月于河北医科大学第四医院肾内科就诊的慢性肾脏病患者作为研究对象,记录受试者一般资料,生化资料及血管钙化资料。空腹采血分离血清,采用实时荧光定量PCR法及探针法检测miR-205及Runx2的表达。采用agatston钙化积分系统对血管钙化的存在及严重程度进行计算与评估。根据血管钙化积分将患者分为无钙化组、轻中度钙化组、重度钙化组,将三组患者miR-205、Runx2表达情况进行对比,采用方差分析或K-W秩和检验分析miR-205、Runx2的表达与血管钙化及各临床指标的相关性,Spearman相关分析法及多元有序Logistic回归分析CKD血管钙化的危险因素。ROC曲线分析评估miR-205在CK D患者血管钙化中的诊断价值。P＜0.05差异有统计学意义。结果:1.三组患者的年龄、高血压病、糖尿病、冠心病、血磷、血钙、血镁、白蛋白、iPTH、25羟维生素D3均存在差异;2.miR-205、Runx2的表达在三组患者中存在差异,血管钙化程度越高,miR-205的表达越低,Runx2的表达越高;3.年龄、血磷、血钙、i PTH、25羟维生素D、Runx2、miR-205与钙化显著相关,miR-205水平与血管钙化呈负相关,Runx2水平与血管钙化呈正相关,miR-205水平与Runx2水平呈负相关;4.miR-205低表达可能是慢性肾脏病患者血管钙化的独立危险因素;5.miR-205诊断血管钙化的AUC为0.796,灵敏度和特异度分别为57.4%与84.6%,提示miR-205低表达对血管钙化有较强的预测作用。结论:CKD患者发生血管钙化时血清中miR-205低表达,Runx2高表达。血清miR-205的低表达是CKD患者血管钙化的独立危险因素,并有望成为诊断的早期潜在标志物。