[目 的]阐明毒品依赖机制,是毒品问题科学研究的关键性科学问题。本课题拟探讨甲基苯丙胺依赖SD（Sprague Dawley,SD）大鼠伏隔核差异表达的微小核糖核酸（MicroRNA,miRNA）及其靶基因调控机制,为甲基苯丙胺依赖机制提供间接的科学依据,为后续的戒断治疗提供新的靶点。[方 法]1建立甲基苯丙胺依赖SD大鼠模型,即为给药组（MA4组）;对照组大鼠腹腔内注射同等剂量的生理盐水（Control组）。通过条件性位置偏好实验（Conditional Place Preference,CPP）和刻板行为实验,检测大鼠对甲基苯丙胺的依赖性。处死大鼠,获取大鼠的伏隔核,先采用Glees银染、苏木精-伊红（Hematoxylin-Eosin,HE）染色观察大鼠伏隔核神经元和轴突的形态学改变。再采用免疫荧光实验检测大鼠伏隔核神经元特异性烯醇酶（Neuron Specific Enolase,NSE）阳性表达的神经元数量变化,以及胶质纤维酸性蛋白（Glial Fibrillary Acidic Protein,GFAP）阳性表达的星形胶质细胞数量变化。2对大鼠伏隔核组织进行miRNA测序分析,并对差异表达的miRNA进行生物学信息学分析;通过基因本体论（Gene Ontology,GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）富集分析预测差异表达的miRNA靶基因的生物学功能。3利用生物信息学分析软件,筛选出表达显著的miRNA共同靶基因;采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Quantitative Real-Time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR）检测大鼠伏隔核中表达显著的miRNA及其靶基因信使核糖核酸（Message RNA,mRNA）的表达水平;采用蛋白质免疫印记实验（Western Blotting,WB）测定表达显著的miRNA靶蛋白的表达水平,以及Wnt信号通路关键蛋白的表达水平。[结 果]1与Control组相比,MA4组大鼠在伴药箱的停留时间明显延长（P＜0.05）,刻板行为分数明显升高（P＜0.05）。MA4组大鼠伏隔核神经元轴突扭曲严重,神经元极化形态消失,出现水肿;胶质细胞明显增生,并形成了胶质小结;NSE阳性表达的神经元数量显著减少（P＜0.05）,而GFAP 阳性表达的星形胶质细胞数量显著增加（P＜0.05）。2 miRNA测序结果显示,MA4组大鼠的伏隔核中40个miRNA差异表达,其中17个miRNA上调,23个miRNA下调。GO富集分析显示,差异表达的miRNA靶基因主要参与细胞成分调控、定位调控、转运调控等;KEGG富集分析显示,差异表达的miRNA靶基因主要集中在Wnt信号通路、剪接体、溶酶体、轴突引导等。3 与 Control 组相比,MA4 组大鼠伏隔核中 miR-217-5p、miR-31b、miR-28-3p、miR-31a-5p、miR-547-3p 和 miR-216b-5p 的表达水平显著上调（P＜0.05）,而miR-1b、miR-144-5p、miR-202-5p、miR-133a-3p、miR-133c和miR-451-5p 的表达水平显著下调（P＜0.05）。通过生物信息学分析软件,在前述表达显著的miRNA中筛选出5个共同靶基因,即5-HTR1B、RBM8A、SYT7、RTN4和SV2A。MA4组大鼠伏隔核中5-HTR1B、RTN4和SV2A在靶基因mRNA和靶蛋白的表达水平显著上调（P＜0.05）,而RBM8A和SYT7基因在mRNA和蛋白质水平上的表达显著下调（P＜0.05）。Wnt信号通路中的关键蛋白β-catenin（β-连环蛋白）、糖原合酶激酶-3β（Glycogen Synthase Kinase-3β,GSK3β）、G1/S-特异性周期蛋白 D1（G1/S-Specific Cyclin-D1,Cyclin D1）、C-myc 以及 Runt 相关转录因子 2（Runt-related Transcription Factor 2,Runx2）均显著下调（P＜0.05）。[结 论]1甲基苯丙胺改变了 SD大鼠伏隔核神经元和轴突的形态学结构,并推测甲基苯丙胺可能是通过降低大鼠伏隔核NSE 阳性表达的神经元数量,同时促进GFAP阳性表达的星形胶质细胞增生,从而引发神经炎性反应及氧化损伤。2富集分析预测伏隔核差异表达的miRNA靶基因主要参与细胞成分调控、定位调控、转运调控等,主要集中在Wnt信号通路、剪接体、溶酶体、轴突引导等。3推测伏隔核差异表达的miRNA可能是通过靶向调控5-HTR1B、RTN4、SV2A、RBM8A和SYT7的靶基因及其靶蛋白,从而抑制Wnt信号通路的活性,并参与了甲基苯丙胺依赖行为的调控。