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目的:本课题通过建立慢性心理应激小鼠模型,观察不同程度心理应激对小鼠动情周期、生殖激素水平、卵泡形态以及卵泡凋亡程度的影响,基于BMP15/Smad4通路研究心理应激诱导卵泡凋亡的分子机制,为中医“嫉妒不孕”理论现代化提供科学依据。方法:1慢性心理应激对小鼠动情周期及生殖激素的影响80只4-5周龄雌性ICR小鼠随机分为4组:对照组、心理应激强刺激组、心理应激中刺激组、心理应激弱刺激组,制备慢性不可预见性温和应激模型。（1）通过监测小鼠体重变化、糖水偏好实验、旷场实验,评估小鼠心理应激造模后行为学改变;（2）ELISA法测定小鼠血清中CRH、ACTH、CORT含量;（3）采用阴道脱落细胞法对小鼠动情周期进行连续观察,评估各组小鼠动情周期持续时间及紊乱程度;（4）ELISA法测定小鼠动情前期血清中FSH、LH、E2、AMH浓度。2慢性心理应激对小鼠卵泡发育和凋亡的影响（1）对各组不同动情周期小鼠卵巢组织进行HE染色,光镜下观察各组小鼠卵泡及黄体形态学变化;（2）TUNEL法检测各组小鼠卵巢卵泡凋亡情况。3基于BMP15/Smad4通路探究心理应激介导卵泡发育和凋亡的机制（1）q PCR法检测各组小鼠卵巢组织中Bax、Bcl-2、Caspase-3基因的表达;（2）Western Blot法检测小鼠卵巢组织中BMP15、Smad4、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达。结果:1各组小鼠行为学评价及小鼠血清中CRH、ACTH、CORT含量的变化与对照组相比,心理应激强、中、弱刺激组小鼠造模后体重显著降低（P＜0.01）;各应激组小鼠糖水消耗量显著减少,糖水偏好系数降低（P＜0.01）;旷场实验中,心理应激强、中、弱刺激组小鼠总移动距离显著降低（P＜0.01）,总静止时间显著延长（P＜0.01）,进入中央区域次数显著增多（P＜0.01）,在中央区域停留时间显著降低（P＜0.01）。2各组小鼠造模后动情周期及血清FSH、LH、E2、AMH水平的变化与对照组相比,心理应激强、中、弱刺激组小鼠动情周期持续时间显著延长（P＜0.01）,并表现不同程度的周期紊乱,其中强刺激组与中刺激组表现为动情期缺失,弱刺激组表现为动情间期停滞。与对照组相比,强刺激组小鼠动情前期血清中FSH、LH、E2、AMH水平均显著降低（P＜0.01）。中刺激组小鼠血清中LH、E2、AMH水平较对照组显著降低（P＜0.01）,FSH水平较对照组无显著差异（P＞0.05）;与强刺激组相比,中刺激组血清中FSH、E2显著升高（P＜0.05）。与对照组相比,弱刺激组小鼠血清中AMH水平显著降低（P＜0.01）,FSH、LH、E2较对照组无显著差异（P＞0.05）;弱刺激组小鼠血清中FSH、LH、E2、AMH水平较强刺激组均显著升高（P＜0.01）;FSH及AMH水平较中刺激组显著升高（P＜0.05）。3各组小鼠不同动情周期卵巢形态学变化及凋亡程度的比较动情前期对照组小鼠卵巢内各级卵泡发育良好,窦卵泡直径较大,卵泡内颗粒细胞排列整齐;与对照组相比,强刺激组小鼠卵巢组织严重纤维化,闭锁卵泡较多,窦卵泡数量减少并伴随直径缩小。动情期对照组小鼠卵巢内可见新形成的黄体组织,窦卵泡发育良好,直径较动情前期小;与对照组相比,强刺激组小鼠动情期卵巢中闭锁卵泡增多,颗粒细胞排列松散,新形成的黄体数量减少,可见陈旧黄体。动情后期对照组小鼠卵巢中可见大量初级、次级卵泡,以及一些新形成的黄体,黄体体积较小;与对照组相比,弱刺激组小鼠卵巢中新形成的黄体数量较少,窦前卵泡数量减少,闭锁卵泡增多;动情间期对照组可见大量新形成的直径较大的黄体,伴随发育良好的窦卵泡;与对照组相比,中刺激组小鼠卵巢中可见大量陈旧黄体,新形成的黄体数量较少,伴见闭锁的窦卵泡。与对照组相比,心理应激强、中、弱刺激组小鼠卵巢组织中凋亡卵泡的平均荧光强度显著升高（P＜0.05）;中、弱刺激组的卵泡凋亡程度较强刺激组显著降低（P＜0.05）;弱刺激组卵泡凋亡程度较中刺激组显著下降（P＜0.05）。4各组小鼠卵巢组织BMP15、Smad4以及凋亡相关因子Bax,Bcl-2,Caspase-3水平的变化与对照组相比,强刺激组小鼠卵巢组织中Bax、Caspase-3 m RNA水平显著升高（P＜0.05）,Bcl-2 m RNA水平显著降低（P＜0.01）。与对照组相比,中刺激组小鼠卵巢中Bax m RNA的表达显著升高（P＜0.05）,Bcl-2 m RNA的表达显著降低,Caspase-3 m RNA的表达无显著差异;与强刺激组相比,中刺激组卵巢中Bax的基因表达显著降低（P＜0.01）,Bcl-2的基因表达显著升高（P＜0.05）。弱刺激组卵巢组织中Caspase-3的基因表达较对照组显著升高（P＜0.05）,Bax、Bcl-2的基因表达较对照组无显著差异（P＞0.05）;与强刺激组相比,弱刺激组卵巢中Bax m RNA表达显著降低（P＜0.05）,Bcl-2 m RNA表达显著升高（P＜0.01）;弱刺激组卵巢中Bax m RNA表达水平较中刺激组显著降低。与对照组相比,强刺激组小鼠卵巢中Bax、Caspase-3蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,Bcl-2的蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）。与对照组相比,中刺激组小鼠卵巢中Bax的蛋白表达显著升高（P＜0.05）,Bcl-2的表达显著降低（P＜0.05）,Caspase-3的表达较对照组无显著差异（P＞0.05）。弱刺激组小鼠卵巢中Bax、Caspase-3的蛋白表达较对照组显著升高（P＜0.01）;与强刺激组相比,弱刺激组小鼠Caspase-3的蛋白表达含量显著降低（P＜0.05）,Bcl-2的蛋白表达显著升高（P＜0.05）。与对照组相比,强、中刺激组小鼠卵巢中BMP15、Smad4的蛋白表达显著降低（P＜0.05）;中刺激组小鼠卵巢中BMP15的蛋白表达较强刺激组显著升高（P＜0.01）。弱刺激组小鼠卵巢中Smad4的蛋白含量较对照组显著减低（P＜0.01）,BMP15的蛋白表达较对照组无显著差异（P＞0.05）;弱刺激组小鼠卵巢中BMP15的蛋白表达显著高于强、中刺激组（P＜0.01）。结论:1慢性心理应激导致小鼠动情周期紊乱,持续时间延长,血清FSH、LH、E2,以及AMH水平显著下降,且降低程度与应激强度相关。2慢性心理应激导致小鼠初级卵泡、次级卵泡及窦卵泡数量减少,闭锁卵泡增多,新形成的黄体数量减少,陈旧黄体数量增加,卵泡凋亡增加,卵泡发育阻滞。3慢性心理应激可能通过BMP15/Smad4信号通路介导卵泡凋亡,阻碍卵泡发育。