脊髓星形胶质细胞P2X7受体参与电针抑制IBS内脏痛敏的机制研究

来源 :上海中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong577
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目的:探索脊髓星形胶质细胞P2X7受体参与电针抑制肠易激综合征内脏痛敏的机制。方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠法制备IBS内脏痛敏大鼠模型,第一部分将大鼠分为正常组、模型组及模型+电针组,采用电针双侧“足三里”穴、“三阴交”穴进行治疗,电针治疗参数为1 m A,2 Hz,每次15分钟,连续治疗7天,记录各组大鼠CRD刺激下腹部撤回反射评分(AWRs),观察电针对IBS内脏痛大鼠的镇痛效应;第二部分将大鼠分为正常组、模型组、模型+电针组及氟代柠檬酸+电针组,在每次电针治疗前给予模型大鼠鞘内注射星形胶质细胞活性抑制剂氟代柠檬酸,通过对比各组AWR评分及大鼠脊髓NMDA受体、P2X7受体表达的变化,阐述脊髓星形胶质细胞在电针治疗IBS内脏痛敏中的作用;第三部分将大鼠分为正常组、模型组、模型+电针组、P2X7受体拮抗剂+电针组、P2X7受体激动剂+电针组,在每次电针治疗前给予模型大鼠鞘内注射P2X7受体激动剂Bz ATP或拮抗剂A740003,通过对比各组AWR评分及大鼠脊髓NMDA受体、星形胶质细胞GFAP表达的变化,阐述P2X7受体在电针治疗IBS内脏痛敏中的作用。在实验中观察大鼠活动状态、饮食及精神状况等,记录并比较各组大鼠在不同CRD刺激强度(20,40,60,80mm Hg)下的AWR评分,采用Western Blot及Real-time q PCR检测大鼠脊髓NMDA受体、P2X7受体、星形胶质细胞标志蛋白GFAP蛋白及m RNA的变化情况,采用免疫荧光染色观察电针及P2X7受体激动剂或拮抗剂对大鼠脊髓星形胶质细胞活性的影响。结果:TNBS溶液灌肠后3周,结肠HE染色显示大鼠结肠炎症已基本消退,模型组大鼠在各强度CRD刺激下相比正常组AWR评分显著升高(P<0.05),提示模型制备成功。第一部分中,在各强度CRD刺激下,模型组相比正常组AWR评分显著升高(P<0.05),电针组相比模型组显著降低(P<0.05);第二部分中,在相同球囊压力下,模型组相比正常组AWR评分显著升高(P<0.05),电针组与氟代柠檬酸+电针组相比模型组显著降低(P<0.05),电针组与氟代柠檬酸+电针组相比无显著差异。电针组与氟代柠檬酸+电针组脊髓NMDA受体、P2X7受体蛋白表达相比模型组显著减少(P<0.05),NMDA受体NR1亚基与P2X7受体m RNA表达显著减少(P<0.05),并且电针组相比氟代柠檬酸+电针组无显著差异;第三部分中,在相同球囊压力下,模型组相比正常组AWR评分显著升高(P<0.05),电针组与P2X7受体拮抗剂+电针组相比模型组显著降低(P<0.05),电针组相比P2X7受体激动剂+电针组显著降低(P<0.05)。电针组、P2X7受体拮抗剂+电针组相比模型组大鼠脊髓NMDA受体、GFAP m RNA表达显著减少(P<0.05),NMDA-NR2B蛋白表达显著减少(P<0.05)。电针组相比P2X7受体激动剂+电针组大鼠脊髓NMDA-NR2B亚基蛋白表达显著减少(P<0.05)、NMDA受体与GFAP m RNA表达显著减少(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,电针与P2X7受体拮抗剂均降低大鼠脊髓GFAP的表达。结论:电针可能通过抑制脊髓星形胶质细胞P2X7受体而下调NMDA受体的表达,从而发挥缓解IBS内脏痛的作用。
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