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研究目的:本研究利用脂质体作为生物膜的模型膜,将不同摩尔百分浓度的五味子甲素和五味子乙素加入制备成DPPC脂质体,通过各种技术手段分别从结构、微观等方面研究五味子甲素和五味子乙素与DPPC脂质体膜的相互作用,对比两种药物与脂质体膜的相互作用从而探讨分子结构的差异和药物不同摩尔百分浓度对磷脂双层膜的不同影响以及从分子微观层面解释发挥某种药理作用的作用机制。研究方法:1、对五味子甲素和五味子乙素进行高效液相色谱含量测定方法学考察,包括专属性、线性、重复性、精密度、稳定性和准确度实验。2、采用马尔文动态散射粒径仪和JEM1400透射电镜对脂质体大小和形态进行表征,并通过超高速离心法结合高效液相色谱对脂质体的包封率进行测定。3、利用差示扫描量热技术研究不同摩尔百分浓度的五味子甲素和五味子乙素与脂质体膜的相互作用,通过检测相变温度、相变焓等量热参数以及相变峰的变化,说明药物加入以后对脂质体的热力学属性影响。利用同步辐射X射线衍射技术确定脂质体片层相结构和不同温度下脂质体存在的相态。利用傅立叶变换红外光谱技术研究两种药物对DPPC脂质分子特征基团（-CH3、-CH2、-PO2-、-C=O）的影响,从而说明药物对脂质体膜在分子层面的影响。利用荧光共振能量转移法通过检测不同摩尔百分浓度荧光标记药物与DPPC脂质体在特定温度下荧光强度的变化说明五味子甲素和五味子乙素嵌入脂质体的可能性和作用程度。4、比较五味子甲素和五味子乙素与DPPC双层膜的相互作用的差异,并探讨这种差异与二者结构和不同药理作用之间的联系。研究结果:1、选用 ACEEXCELC18色谱柱（4.6×250mm,5μm）;甲醇-水（93:7）为流动相;流速0.7 mL.min-1;检测波长254 nm;柱温30℃;进样体积10 μL。结果表明,DPPC脂质体的加入并未对两种药物的检测造成干扰。五味子甲素在1.02～5.10 μg范围内线性关系良好,线性回归方程表现为Y=48.4233X-2.1286（R2=0.9999）;日内RSD为0.29%（n=6）,日间RSD为0.67%（n=3）,仪器精密度良好;重复性RSD为0.89%（n=6）,方法重复性良好;稳定性RSD为0.34%（n=7）,五味子甲素样品在12 h内稳定性良好,五味子甲素/DPPC脂质体低、中、高浓度的回收率分别为97.95±0.24%、95.35 ±0.12%和 98.49±0.04%,RSD 分别为 0.27%、0.14%和 0.04%（n=3）;五味子乙素在1.00～5.00 μg范围内线性关系良好,线性回归方程表现为Y=41.2671X+0.6791（R2=0.9999）;日内RSD为0.08%（n=6）,日间RSD为0.18%（n=3）,仪器精密度良好;重复性RSD为0.30%（n=6）,方法重复性良好;稳定性RSD为0.30%（n=7）,五味子乙素样品在12h内稳定性良好,五味子乙素/DPPC脂质体低、中、高浓度的回收率分别为 96.57±0.40%、95.81±0.01%和 98.96±0.22%,RSD分别为 0.46%、0.01%和 0.22%（n=3）。2、利用透射电镜观察制备好的药物脂质体,结果显示五味子甲素和五味子乙素脂质体外观圆整且分布均匀,测得五味子甲素平均粒径为181.6 nm,多分散系数（PDI）为0.245;五味子乙素平均粒径为180.1 nm,多分散系数（PDI）为0.237。2.5 mol%、5 mol%、7.5mol%、15mol%五味子甲素/DPPC脂质体包封率分别为77.86±0.29%、70.89± 0.04%、72.55 ± 0.01%、76.32± 0.19%;2.5 mol%、5 mol%、7.5 mol%、15 mol%五味子乙素/DPPC脂质体包封率分别为 78.04±0.16%、73.83±0.10%、75.54±0.06%、77.93±0.03%。3、五味子甲素/DPPC脂质体的DSC实验结果表明随着不同摩尔百分浓度药物的加入,主相变温度在低于5 mol%时下降,相变焓也随之降低;在5＜x≤7.5 mol%时主相变温度下降趋势减缓,相变焓开始增加,之后在7.5＜x≤15 mol%时主相变温度继续下降并在15 mol%时达到最低,相变焓也继续下降。在药物浓度为2.5 mol%时预相变已经消失,不同摩尔百分浓度的五味子甲素加入均造成主相变半峰宽的增加并出现分相现象。XRD结果表明,五味子甲素/DPPC脂质体均呈现出片层结构,且在2.5 mol%时所测得的衍射图谱已经呈现出脂质体处于波动凝胶相,也证明了 DSC曲线中预相变的消失,通过分析对DPPC分子疏水尾链间距的影响,发现不同摩尔百分浓度五味子甲素的加入均使疏水尾链间距减小,表明药物分子始终有一部分存在并作用于DPPC分子的疏水尾链区域。FTIR实验表明随着五味子甲素的加入,vasCH3在2.5＜x≤5 mol%时蓝移1.9cm-1;而vasCH2和vsCH2吸收峰在0＜x≤5 mol%时峰位值上下波动,表明药物在低于5 mol%时有药物作用于疏水尾链,尾链柔韧性发生变化;同时在7.5＜x≤15 mol%时vasPO2-向高波数方向移动1.9 cm-1,说明有部分药物作用于DPPC分子的头部区域;水化vC=O峰位值较纯DPPC分子均向高波数方向移动,说明有部分药物进入脂质体的界面区域并促使羰基的水化程度减小,界面区域脱水。4、五味子乙素/DPPC脂质体的DSC实验结果表明随着不同摩尔百分浓度药物的加入,低于2.5 mol%时随着药物分子的加入主相变温度急剧减小,主相变焓也在下降;在2.5＜x≤7.5 mol%时主相变温度轻微有所降低,主相变焓出现上下波动的变化趋势;在7.5＜x≤15 mol%主相变温度开始升高,但始终低于空白脂质体主相变温度,主相变焓也同步升高。同时在20℃下0＜x≤15 mol%的浓度范围内DPPC脂质体相态并未消失,DSC曲线都呈现出预相变和主相变峰。从总体上看药物的加入造成主相变温度略微降低,且对主相变半峰宽并无显著影响,呈上下轻微波动。XRD结果表明,五味子乙素/DPPC脂质体呈现出片层结构,且在所设定的浓度范围内测得的衍射图谱也证明脂质体处于层状凝胶相,药物的加入并未影响其存在的相态。FTIR实验表明vasCH3在5＜x≤7.5 mol%时蓝移1.9 cm-1;而vsCH2吸收峰在0＜x≤2.5 mol%时向低波数方向发生位移,之后在5＜x≤7.5 mol%向高波数方向移动,亚甲基的扭转式构象增加;vasCH2和vasPO2-并没有发生位移;水化vC=O峰位值较纯DPPC分子均向高波数方向移动,说明有部分五味子乙素分子进入脂质体的界面区域并促使羰基的水化程度减小,界面区域脱水。5、通过对比分析五味子甲素/DPPC脂质体和五味子乙素/DPPC脂质体不同实验结果,可以看出五味子甲素与DPPC脂质体的相互作用明显强于五味子乙素,荧光共振能量转移实验结果说明在相同浓度下五味子乙素与DPPC脂质膜相互结合更稳定。结论:五味子甲素和五味子乙素两种药物均以浓度依赖性方式影响DPPC脂质体,但具体的浓度依赖性和影响程度明显不同;同时五味子甲素和五味子乙素的加入都可以在不同程度上降低脂质体的主相变温度,增加脂质体膜的流动性,在同一摩尔浓度下五味子甲素载药脂质体的主相变的相变协同性和主相变温度均远低于五味子乙素/DPPC脂质体,且五味子甲素脂质体的层间距离整体上大于五味子乙素,对脂质体膜的作用效应强于五味子乙素脂质体;比较两种药物与脂质体的相互作用,发现五味子甲素对DPPC脂质体的扰动效应更大,在低摩尔浓度下就能促使脂质体波动凝胶相的形成,而更高的相变协同性和较强的荧光共振能量转移信号以及与纯DPPC脂质体相近的主相变温度均说明五味子乙素与DPPC脂质体有更稳定的作用效果。