【摘 要】
：
目的:本文采用液质联用技术,从神经递质代谢层面构建定量-靶向代谢组学-分子生物学的方法学体系,寻找钩藤及其单体成分干预自发性高血压大鼠差异性神经递质及代谢通路,同时采用分子生物学技术发现齐墩果酸及异钩藤碱对该病治疗的特异性。方法:1.采用UPLC-Q-Extractive/MS-Full mass scan技术,正离子检测模式下建立23种内源性神经递质的定性定量分析方法。2.在建立的定性定量分析方
论文部分内容阅读
目的:本文采用液质联用技术,从神经递质代谢层面构建定量-靶向代谢组学-分子生物学的方法学体系,寻找钩藤及其单体成分干预自发性高血压大鼠差异性神经递质及代谢通路,同时采用分子生物学技术发现齐墩果酸及异钩藤碱对该病治疗的特异性。方法:1.采用UPLC-Q-Extractive/MS-Full mass scan技术,正离子检测模式下建立23种内源性神经递质的定性定量分析方法。2.在建立的定性定量分析方法的基础上,采用靶向代谢组学技术对钩藤和其成分干预前后自发性高血压大鼠五个脑区中神经递质进行分析研究。利用多元统计分析寻找体内显著性变化的关键神经递质代谢物。3.采用ELISA试剂盒和RT-PCR方法检测不同脑区中神经递质代谢通路中关键神经递质合成酶的含量及m RNA相对表达量的差异,从分子生物学层面验证靶向代谢组学的结果,确定钩藤及其单体成分干预原发性高血压的机制。4.利用RT-PCR方法检测齐墩果酸及异钩藤碱干预前后,自发性高血压大鼠及正常大鼠不同脑区中关键神经递质合成酶m RNA相对表达量的差异,发现二者对该病治疗的特异性。结果:1.建立了适合于23种内源性神经递质代谢物定量分析的方法。标准曲线线性关系良好,线性相关系数大于0.99。日内和日间精密度小于23.83%,准确度分别在74.45%-128.25%,70.12%-122.39%之间;日内稳定性和日间稳定性精密度小于26.38%,准确度分别在71.28%-128.63%和70.1%-126.31%之间,方法显示了较好的准确度和精密度。因此,该方法可靠、有效,能够满足23种内源性神经递质成分定量分析的需要。2.结合自发性高血压大鼠的脑组织样本定量结果和多元统计分析结果发现,包含氨基酸类神经递质及单胺类神经递质等在内的16种神经递质与原发性高血压显著相关。分子生物学结果发现自发性高血压大鼠脑内与神经递质代谢相关的神经递质限速酶DDC,COMT,MAO,GAD67,DBH,TH和ACHE的m RNA表达和含量异常。神经递质靶向代谢组学结果与分子生物学结果联合分析发现:（1）:异钩藤碱可通过下调下丘脑、纹状体中ACHE的m RNA的表达及海马中的含量调控胆碱能代谢,下调纹状体、下丘脑中DDC、MAO、TH等m RNA表达调控酪氨酸代谢,上调下丘脑GAD67的m RNA表达调控谷氨酸代谢;（2）:齐墩果酸可通过上调颞叶、海马中GAD67的m RNA表达及含量调控谷氨酸代谢,下调纹状体中DDC、DBH、TH的m RNA表达调控酪氨酸代谢,下调下丘脑中DDC、COMT、MAO、DBH、TH的m RNA表达调控酪氨酸、组氨酸代谢,下调纹状体及颞叶中ACHE的m RNA表达调控胆碱能代谢;（3）:钩藤碱可通过上调海马中GAD67的含量调控谷氨酸代谢,下调纹状体中ACHE的m RNA表达调控胆碱能代谢,还可调节下丘脑及颞叶的精氨酸代谢;（4）:钩藤药材可通过下调纹状体ACHE的m RNA表达调控胆碱能代谢;（5）:经异钩藤碱及齐墩果酸干预后,发现自发性高血压大鼠较正常大鼠中五个脑区中限速酶表达发生显著变化,而正常大鼠干预后五个脑区中的限速酶基本无显著性差异,说明异钩藤碱及齐墩果酸对原发性高血压具有特异性治疗作用。结论:本文从神经递质靶向代谢组学层面结合分子生物学技术初步揭示了钩藤及其单体成分干预自发性高血压大鼠的机制。研究表明自发性高血压大鼠存在神经递质代谢紊乱,钩藤及其单体成分可以特异性调节由原发性高血压导致的神经递质代谢紊乱,其主要机制为:异钩藤碱通过调节海马、纹状体及下丘脑的胆碱能代谢激活迷走神经介导的“胆碱能抗炎通路”减轻血压升高引起的炎症反应,调节纹状体、下丘脑中酪氨酸代谢抑制交感神经兴奋所致心率及代谢加快;齐墩果酸通过颞叶、海马的谷氨酸代谢保护心肌缺血组织,同时抑制神经功能继发性损伤;钩藤碱通过调节下丘脑、颞叶中精氨酸代谢改善血管平滑肌张力,钩藤药材通过调节海马及纹状体的胆碱能代谢发挥抗炎舒缓达到降血压效果,以上发现体现了中药“多成分、多靶点”的作用机制。
其他文献
目的:对现阶段金银花相关质量标准以及影响金银花药材饮片品质的因素进行调查综述,并对三大主产区金银花药材质量进行了比较;基于市场调研,对市售济银花的质量进行考察,从药材饮片的外观形态、活性成分含量等方面对药材、饮片（生品、炭品）质量的影响因素进行了系统全面的研究,以金银花传统分级方法为依据,结合现代分析检验技术,对中药济银花药材饮片进行规格等级及质量评价研究,制定济银花药材、饮片等级行业新标准。方法
目的:提取金银花总多糖,优化其除蛋白工艺;筛选抗病毒活性组分;对抗病毒活性组分进行分离纯化,并初步表征其结构;对不同批次的金银花多糖组分进行指纹图谱研究。方法:1.采用水提醇沉法提取金银花总多糖,响应面法优化金银花多糖的除蛋白工艺,并对金银花总多糖进行分级醇沉。2.对金银花分级多糖进行体外抗病毒活性研究,测定金银花各多糖组分对呼吸道合胞病毒（RSV）的抑制作用。3.采用DEAE-52、Sephad
目的:分析比较不同品种、不同采收期、不同干燥方式和不同发育部位对山楂药材质量的影响,为提高药材质量,促进山楂资源的综合开发利用等方面提供理论依据。方法:利用HPLC分析比较不同品种山楂药材中黄酮类、酚酸类等活性成分含量的差异,并采用主成分分析法对山楂各品种的活性成分含量进行分析。采集不同采收期山楂果实及叶片,观测其外观形态指标,研究活性成分含量随采收期的动态积累情况,确定山楂适宜的采收期。用4种不
目的:研究建立甘草和炙甘草中化学成分的快速定性分析方法,通过分析生炙甘草成分差异,从化学角度为解析甘草蜜炙原理提供实验依据。以脾虚动物模型为实验对象,非靶向代谢组学技术研究脾虚大鼠体内代谢变化找到与疾病密切相关的代谢物,计算标志物代谢趋势、总结整体代谢规律,并找到代谢通路。整合上述蜜炙前后成分差异及代谢组学变化数据,综合分析阐明上述各因素之间的关联性,归纳总结甘草蜜炙增效炮制原理。方法:甘草和炙甘
目的:通过不同产区、生长各期监测丹参植株整体形态指标、根部活性成分及不同发育部位抗氧化活性,探究产地因素对丹参药材质量的影响,为丹参开发药用部位、活性成分及药理药效的进一步研究提供理论依据。为进一步了解丹参在山东省内不同区域品质差异,对山东省内不同产区丹参药材的活性成分与气候因子、土壤因子进行相关性研究,探讨气候、土壤等生态因素对丹参药材品质的影响,为丹参药材适生基地及质量提升提供依据。方法:以紫
目的:虫草素作为蛹虫草中一种活性物质广受人们关注,具有广泛的药理学功效,由于它的稀有性和特殊性,在自然界中获得虫草素具有一定的困难,目前虫草素的主要来源是生物合成法,本研究利用液体深层发酵方式,以虫草素产量为指标,探究了培养方式、添加物质对虫草素产量的影响,筛选大孔吸附树脂纯化虫草素,以最大程度地提高虫草素产量,为虫草素的广泛应用提供了实验依据和参考。方法:本研究考察了液体深层发酵培养方式对虫草素
目的:从活性成分体内吸收与代谢角度探究远志炮制的增效机理。方法和结果:（1）远志中糖酯类化合物在大鼠胃肠的代谢产物研究。采用大鼠在体胃肠灌流模型,用HPLC法结合已知对照品定位,检测远志中8种糖酯类成分（西伯利亚远志糖A5、西伯利亚远志糖A6、3,6’-二芥子酰基糖、远志糖酯A、远志糖酯B、远志糖酯C、远志寡精A、远志寡精H）在大鼠胃肠中的代谢产物。结果表明,西伯利亚远志糖A5在胃和小肠中代谢为阿
目的:研究丹参药材外观性状与内在质量的相关性及酒丹参饮片不同炮制程度与体外凝血功能的相关性,建立丹参药材及其饮片等级质量标准。方法与结果:（1）丹参药材外观性状与内在质量相关性研究。通过HPLC法测定丹参根部脂溶性成分（丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮ⅡA）、水溶性成分（丹酚酸B）含量,探究表面颜色、直径和质地与内在质量之间的相关性。结果得出丹参根的直径与丹参酮类成分含量呈负相关,直径越大,丹参酮类成分
目的:对藏药灰兜巴的管巢长度及其从管巢中采集到的蜘蛛蜕皮进行分析,以辨析藏药灰兜巴基源蜘蛛;对灰兜巴进行理化分析,促进其开发与利用;利用溶茧酶将不溶性的蛛丝蛋白溶解,制成可被人体吸收利用的可溶性小分子产物,建立酶解工艺,探究其治疗糖尿病及其并发症低蛋白血症的作用效果。方法:通过查阅文献,以及测量管巢长度,观察从灰兜巴中采集的蜘蛛蜕皮的背甲形状,对灰兜巴基源动物进行辨析。利用化学方法对灰兜巴水煎煮液
目的:为寻求新的玛咖抗疲劳保健食品的原料,并系统的确定玛咖水提物抗疲劳功效成分、结构组成、作用机制,并深入探究分子段组成与抗疲劳活性的关系。本研究在确定丽江玛咖水提物可作为保健食品原料的基础上,进一步确定其功效成分多糖的抗疲劳活性,并根据分子量进行分段,确定活性分子段,结构组成,并探究其作用机制。以期为补充抗疲劳保健食品原料来源,完善保健食品功能性成分、作用机制的研究,探究分子量与活性的关系提供一