【摘 要】
：
目的：研究体外培养条件下PGE2对人外周血CD4+T细胞的免疫调节作用，通过表达谱基因芯片检测发现新的靶基因，通过ELISA、流式细胞术以及免疫印记等方法检测下游产物，进一步阐明PGE2调节CD4+细胞免疫功能的作用机理。方法：①分离健康志愿者捐献的白膜，应用密度梯度离心法分离单个核细胞，应用CD4+单克隆抗体标记的免疫磁珠分离纯化CD4+T细胞。②在13umol/L浓度的PGE2条件下，应用抗C
论文部分内容阅读
目的：研究体外培养条件下PGE2对人外周血CD4+T细胞的免疫调节作用，通过表达谱基因芯片检测发现新的靶基因，通过ELISA、流式细胞术以及免疫印记等方法检测下游产物，进一步阐明PGE2调节CD4+细胞免疫功能的作用机理。
方法：①分离健康志愿者捐献的白膜，应用密度梯度离心法分离单个核细胞，应用CD4+单克隆抗体标记的免疫磁珠分离纯化CD4+T细胞。②在13umol/L浓度的PGE2条件下，应用抗CD3和抗CD28单克隆抗体作为刺激剂，将纯化的CD4+T细胞体外培养12h。收集细胞后提取RNA，进行表达谱基因芯片检测，并应用RT-PCR检测对芯片结果进行验证。③分析芯片结果，发现有意义的基因，应用ELISA、流式细胞术及免疫印记等方法检测目的基因的表达产物。
结果：⑴流式细胞术检测结果显示，应用免疫磁珠分选的CD4+T细胞纯度≥99％。表达谱基因芯片结果表明，与对照组相比，应用13umol/L浓度的PGE2作用12小时后，CD4+T细胞基因表达以下调为主，即以倍数变化1.5倍为准，表达上调的基因有73个，表达下调的基因有1716个，涉及的信号途径主要有肿瘤坏死因子α(TNF-α)与核因子—kB(NF—kB)信号途径、T细胞受体信号途径、白细胞介素2(IL—2)信号途径、MAPK信号途径等。⑵ELISA法检测培养上清的细胞因子浓度，结果表明实验组与对照组相比，干扰素γ(IFN—γ)与TNF-α浓度明显下降。在培养后24、48、72小时等时间点，实验组IFN—γ浓度分别为0、(2.3±4.7)pg/ml、(10.9±4.7)pg/ml，对照组分别为(399.6±332.1)pg/ml、(842.8±479.7)pg/ml、(2963.1±644.9)pg/ml，差异均具有统计学意义。在培养后48小时和72小时，实验组TNF-α浓度分别为113.5±57.3)pg/ml、(189.7±32.0)pg/ml，对照组分别为(1093.7±353.3)pg/ml、(1627.2±498.6)pg/ml，差异均具有统计学意义。但对照组与实验组在各个时间点的IL—2浓度均低于试剂盒检测阈值。⑶流式细胞术检测结果表明实验组和对照组比较，CD4+T细胞CD25、CD69、HLA—DR、CD40等表面抗原表达率下降。
结论：①在体外培养条件下，PGE2对CD4+T细胞的基因表达具有明显调节作用，并且以负性调节为主，表达有差异的基因以免疫相关的细胞信号途径为主。②PGE2作用于CD4+T细胞，明显下调介导GVHD的细胞因子的分泌，并下调与CD4+T细胞免疫激活和辅助刺激相关的表面分子。③体外实验表明，PGE2抑制CD4+T细胞的免疫活性，对于急性GVHD的免疫调节具有一定的应用前景。
其他文献
目的：肺癌是我国发病率和死亡率较高的恶性肿瘤，初诊时2/3已不能手术切除或不能耐受手术。因此肺癌的早期诊断及准确分期对其治疗和预后具有重要的意义。18F-FDG PET/CT能从分子水平通过观察体内代谢变化，在疾病发生解剖结构变化之前做出诊断，已广泛用于肿瘤的诊断、分期、疗效观察。然而由于炎症摄取等因素，18F-FDG PET/CT诊断肺癌存在一定的假阳性和假阴性，本研究目的是对比观察18F-FD
目的：研究舒肝颗粒针对肝纤维化防治作用的机制。为了探讨舒肝颗粒对肝纤维化（HF）的逆转是否有作用，我们采用舒肝颗粒作用于体外培养的大鼠肝星状细胞（HSC），研究其对HSCα-平滑肌动蛋白（Smooth muscle actin，α-SMA）、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）、转化生长因子-β1（Transforming growth factor-β1
目的：1、综合分析首次应用大剂量131I清除分化型甲状腺癌（DTC）患者术后残余甲状腺组织（清甲）效果的影响因素，为提高清甲成功率提供理论依据。2、分析应用大剂量131I清甲治疗的早期不良反应，对其治疗安全性进行评价。3、监测大剂量131I治疗后病房及病区内环境γ射线的辐射剂量率水平，评价医疗活动过程的辐射安全性，明确大剂量131I治疗后对环境的影响。方法：1、首次接受大剂量131I清甲的DTC术
目的:探讨CT导向下经皮肺穿刺125I粒子联合缓释氟尿嘧啶植入剂对老年肺癌患者的近期疗效、并发症，对患者血常规、肝肾功能以及生存质量的影响。方法:42例老年肺癌患者，其中3例患者有2个病灶，1例患者有3个病灶，共有病灶47个。6例合并纵膈淋巴结转移，2例同时合并肺门、纵膈淋巴结转移，10例伴通气功能障碍（均为中心型肺癌和/或伴肺门淋巴结转移致支气管变窄或阻塞），在CT导向下经皮肺穿刺，瘤体及转移淋
目的：通过对甲状腺滤泡状癌细胞株FTC-133 131I辐射后摄碘能力的改变、碘代谢相关的甲状腺特异蛋白及mRNA的改变的研究，明确131I辐射与分化型甲状腺癌细胞摄碘能力变化、131I辐射与分化型甲状腺癌细胞失分化的关系和相关机制；并通过131I辐射的方法获得失分化的FTC-133细胞株。方法：体外培养分化型甲状腺滤泡状癌细胞株FTC-133，用放射性131I（不同剂量，不同时间）辐射后，检测细
目的: 本实验采用可逆性局灶性脑缺血模型，观察大鼠脑缺血再灌注后脑组织海马CA1区cPLA2与ICAM-1的表达及脑组织病理形态学改变；观察缺血侧大脑皮层脑组织cPLA2与ICAM-1的表达及白细胞浸润的情况；并于再灌注的同时给予盐酸戊乙奎醚(PHC)进行干预研究，从抗炎症性损伤角度探讨盐酸戊乙奎醚的脑保护作用及可能机制。 方法: 90只雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham组，n=30）、盐酸
目的: 观察吸入麻醉药异氟烷对新生大鼠学习、记忆的影响及与γ-氨基丁酸A受体(GABAAR)的关系，以期为临床合理用药提供理论参考。 方法: 将84只7d新生雄性SD（P7SD）大鼠随机分为6组（n＝7）：①Con组：生理盐水（NS）0.2ml腹腔注射（ip）；②Sec1组：GABAAR特异性拮抗剂一叶萩碱（Securinine，Sec）3.0mg/kg，用NS稀释至0.2ml ip；③Sec2
目的：比较髌股关节炎患者按照Kellgren—Lawrence（K—L）分级标准分组和按照体质量指数（body mass index，BMI）分组时髌软骨T2（横向弛豫时间）值，探讨其在骨关节炎（osteoarthritis，OA）中的应用价值。方法：选取骨关节炎患者84例，男29例，女55例，年龄26～72岁，平均53.6岁。患者一侧或两侧膝关节符合中华医学会骨科学分会2007年颁布的骨关节炎诊
腹腔镜手术与传统的开腹手术比较，具有创伤小、疼痛轻、恢复快、住院时间短等优点，目前已成为治疗良性妇科疾病的重要术式。随着腹腔镜技术和设备的不断发展，其逐渐应用到恶性肿瘤领域。腹腔镜技术用于恶性肿瘤的安全性，特别是术后出现穿刺点种植和腹腔肿瘤转移、播散，这一问题已引起人们广泛关注，并为此进行深入研究，研究结果也不尽一致。二氧化碳（CO2）气腹引起肿瘤复发及转移的机制亦众说纷纭，分别从酸中毒、免疫损伤
[目的] 急性白血病是一类起源于造血干细胞病变的恶性克隆性疾病，虽然近年来以大剂量化疗为主的综合疗法的广泛应用，使其治疗效果有了明显提高，但仍然有相当一部分患者因疾病复发或耐药而转变成难治，因此积极寻求新的治疗方法，在当前仍然显得尤为必要。 中药厚朴属木兰科木兰属乔木植物，其树皮为我国传统中药材，和厚朴酚(honokiol，HNK)是其主要化学成分之一，属于联苯酚类化合物。现代医学发现和厚朴酚