【摘 要】
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目的:通过全基因体表达谱芯片,筛选慢性根尖周炎中表达差异明显的基因,研究临床慢性根尖周炎病变组织中MITF（Microphthalmia-associated transcription factor）的表达情况,探讨抑制MITF后对破骨细胞增殖和分化的影响,为慢性根尖周炎的治疗提供参考依据。方法:选取我院就诊患者中,因慢性根尖周炎无治疗价值而需拔牙的病例15例为实验组;因正畸需要拔除的健康前磨牙
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目的:通过全基因体表达谱芯片,筛选慢性根尖周炎中表达差异明显的基因,研究临床慢性根尖周炎病变组织中MITF（Microphthalmia-associated transcription factor）的表达情况,探讨抑制MITF后对破骨细胞增殖和分化的影响,为慢性根尖周炎的治疗提供参考依据。方法:选取我院就诊患者中,因慢性根尖周炎无治疗价值而需拔牙的病例15例为实验组;因正畸需要拔除的健康前磨牙或第三磨牙（恒牙）9例为健康对照组。告知患者研究目的和内容,经患者知情同意签字后,收集根尖周组织样本。通过全基因体表达谱芯片,筛选出慢性根尖周炎中表达差异明显的基因;通过Real-Time PCR手段,验证筛选得到的表达差异明显基因MITF;通过诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞后,转染si-MITF,检测MITF对破骨细胞增殖及分化的影响。1、临床样本研究（1）全基因体表达谱芯片,筛选慢性根尖周炎中表达差异明显的基因随机选取实验组和健康对照组各4例样本组织,进行全基因体表达谱芯片检测,通过GO分析筛选出表达差异明显的基因。（2）MITF在慢性根尖周炎中基因水平的表达情况将实验组和健康对照组余下的样本组织,采用Real-Time PCR方法,对上述筛选得到的表达差异明显基因MITF的表达进行检测。2、细胞实验（1）诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞选取培养到三代的RAW264.7细胞,配制浓度为100μg/ml RANKL诱导液,稀释至0.1μg/ml后进行诱导,通过显微镜和TRAP染色观察和记录RANKL诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞的情况。（2）转染si-MITF后对破骨细胞的增殖和分化的影响按照control组、si-MITF组和con-si RNA组,转染破骨细胞后,通过Real-Time PCR方法,验证MITF转染破骨细胞的转染效率。利用CCK8实验,观察破骨细胞的增殖情况。通过Real-Time PCR和Western Blot方法,分别检测MITF转染破骨细胞后,骨破坏标志因子TRAP,CTSK与IL-6的表达情况。结果:1、临床样本研究（1）全基因体表达谱芯片筛选结果通过比对实验组和健康对照组样本的全基因体表达谱芯片结果发现,4例临床样本中筛选出存在显著差异表达的基因共294个,其中上调基因145个,下调基因149个。在慢性根尖周炎中MITF较健康对照组表达明显升高,且有显著差异（P＜0.001）。（2）MITF在慢性根尖周炎样本组织中基因水平的表达情况Real-Time PCR结果显示,在慢性根尖周炎样本组织中,MITF的基因表达水平高于健康对照组,差异有统计学意义（p＜0.05）。2、细胞实验（1）诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞加入RANKL诱导液5天后,RAW264.7细胞的形状发生改变,成不规则多边形,为多核细胞,且细胞核≥3。通过显微镜和TRAP染色观察RANKL诱导RAW264.7细胞形成成熟的破骨细胞。（2）转染si-MITF后对破骨细胞的增殖和分化影响转染效率验证结果显示,将MITF转染破骨细胞后发现,其表达低于control组和con-si RNA组,差异有统计学意义（p＜0.05）,转染效率大约在1/3左右。CCK8实验结果显示,干扰MITF之后,会抑制破骨细胞的增长。Real-Time PCR检测结果显示,MITF-si RNA组破骨细胞活性相关的标志性因子CTSK、TRAP和IL-6的基因水平与control组和con-si RNA组相比,明显下降,差异有统计学意义（p＜0.05）。Western Blot检测结果显示,与control组和con-si RNA组相比,MITF-si RNA组破骨细胞活性相关的标志性因子CTSK、TRAP和IL-6的蛋白水平与Real-Time PCR检测结果一致,表现为明显降低,差异有统计学意义（p＜0.05）。结论:1、MITF在慢性根尖周炎中表达增高。2、干扰MITF后会抑制破骨细胞的增殖及分化。
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背景与目的:卒中（Stroke）在全球是残疾的第一大原因和死亡的第二大原因。然而,卒中在中国是残疾和死亡的第一大原因。在所有卒中类型里,急性缺血性卒中（Acute Ischemic Stroke,AIS）大约占70%。高发病率、高致残率和高死亡率是对健康的重大威胁。越来越多的证据表明,卒中后的免疫炎症反应是影响预后的重要因素,其中中性粒细胞似乎占据着主导地位。近些年,脂质作为炎症反应中重要的媒介和