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【摘 要】目的：通过茂名地区鼻咽癌高危人群筛查，对其中部分高危人群进行追踪研究，希望达到预防或减少鼻咽癌发生。方法：使用改良ELISA法，在2005---2010年间，共筛查有EBVCA/IgA（+）850人（下称筛查组）；随机抽取部分EBVCA/IgA（+）患者360例（下称研究组），采取切断EB病毒感染人群体液传播途径的方法，每半年进行追踪检测一次EBVCA/IgA的S/CO值；随机抽取EBVCA/IgA（-）正常人群300例（下称对照组）进行配对EBVCA/IgA检测。结果：筛查组EBVCA/IgA（+）的S/CO平均值为1.933；研究组第一次EBVCA/IgA的S/CO平均值为1.523；研究组第二次EBVCA/IgA的S/CO平均值为1.505；研究组第三次EBVCA/IgA的S/CO平均值为1.501；研究组第四次EBVCA/IgA的S/CO平均值为1.495；对照组EBVCA/IgA的S/CO平均值为0.712；经统计学分析，筛查组与研究组之间存在统计学差异（p<0.05）。结论：通过鼻咽癌高危人群筛查，对高危人群给予特殊关怀（如通过切断EB病毒感染人群体液途径等方法），有望降低鼻咽癌的发生率。
【关健词】EBVCA/IgA；高危人群；筛查；追踪；鼻咽癌
【中图分类号】R739. 63 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）05-0511-02
The next analysis of high dangerous people for following nasopharyngeal carcinoma
QI Zi-hui，ZHU Hua-zhong，CHEN Rui-lin. LIU fa-he，ZHANG Da-heng.
（ Department of Clinical Laboratorary， People’ s Hospital of Maoming City， Maoming 525000，China.）
Corresponding author： QI Zi-hui ，Email ：QZH966@163.com
【Abstract】Objective：To reduce the rate of nasopharyngeal carcinoma for high dangerous people. Methods：Modified ELISA was applied to measuring serum EBVCA/IgA in 850 EBVCA/IgA（+）original controls（original control group） and in 300 healthy controls （healthy control group）， 360 EBVCA/IgA（+） subjects（study group：the first time 90， the second time 180， the third time 270 ， and the forth time 360 ）.Results：Modified ELISA results of EBVCA/IgA were 1.933 in serum of original controls， 1.523 in serum of study group in the first time ， 1.505 in serum of study group in the second time， 1.501 in serum of study group in the third time， 1.495 in serum of study group in the forth time， and 0.712 in serum of healthy control group .Statistical analysis of modified ELISA EBVCA/IgA results showed there was significant difference between original control group and study group . Conclusion：The means to reduce the rate of nasopharyngeal carcinoma for deference Epstein-Barr virus liquid travel is useful .
【Key words】EBVCA/IgA； High dangerous people； Screening； Track； Nasopharyngeal carcinoma
腫瘤是危害人类健康的严重疾病，到目前为止，肿瘤病因治疗方面全球性仍未彻底突破，从预防方面着手显得尤为重要。EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）是Epstein和Barr于1964年首次成功地将Burkitt非洲儿童淋巴瘤细胞通过体外悬浮培养而建株，并在建株细胞涂片中用电镜观察到疱疹病，EB病毒确可通过唾液等途经传播，常常连同桌吃饭者都不能避免。Nasopharyngeal Carcinoma （NPC）是与EBV密切相关的恶性肿瘤中最常见的一种[1-2]，也是研究报道较多的一种，在我国南方NPC是高发区。本研究通过大规模筛查鼻咽癌高危EBVCA/IgA（+）人群，对高危人群给予关怀，通过切断部分体液途径等方法可达到预防或减少鼻咽癌发生。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 2005---2010年间共筛查茂名地区公务员、.职工、教师等体检25282例，其中男性15132例，年龄介于18岁至82岁之间， 女性10150例，年龄介于18岁至79岁之间。 1.1.2 随机抽取筛查部分EBVCA/IgA （+）患者360例，其中男性240例，年龄介于18岁至75岁之间， 女性120例，年龄介于18岁至67岁之间。
1.1.3 研究组人群坚持用餐使用公筷，每半年追踪检测EBVCA/IgA一次，已进行了4次追踪，每次人数多增加90例，，即第一次90例，第二次180例，第三次270例，第四次360例，抽取研究组人群血样，分离血清，进行EBVCA/IgA检测。
1.1.4 随机抽取EBVCA/IgA （-）正常人群300例，其中男性170例，年龄介于18岁至33岁之间， 女性130例，年龄介于18岁至30岁之间。
1.1.5 仪器与试剂：酶标仪、洗板机为上海生产，型号分别为Multiskan MK3和Wellwash4MK2，离心机为北京离心机厂生产的LG2.4型， EBVCA/IgA ELISA试剂盒由北京新兴四寰生物技术有限公司提供。
1.2 方法
1.2.1 EBVCA/IgA ELISA改良法检测，（下称改良法）： 将EBVCA/IgA ELISA试剂盒从冰箱取出，放置室温下平衡1小时，用双蒸馏水稀释浓缩洗涤液，测定孔设置空白、阴性、阳性、质控孔各2个， ，正常对照组血清与筛查组血清及研究组的血清进行配对检测，空白对照孔加样本稀释液100ul，各检测孔同样加样本稀释液100ul后，正常对照组血清孔与筛查组血清孔及研究组的血清孔分别加指定样本10ul，空白对照孔除外，在反应板上加盖封板膜，振荡混匀，置37℃恒温水浴箱温育30分钟，洗板时先甩去板中反应混合液，用双蒸水快速冲洗板三次，轻拍干反应板，然后洗板机洗板2次 （每次浸泡时间15秒），拍干反应板，除空白孔外，所有孔加酶标记物液100ul（或2滴）， 在反应板上加盖封板膜，振荡混匀，，置37℃恒温水浴箱温育20分钟，洗板时先甩去板中反应混合液，用双蒸水快速冲洗板三次， 轻拍干，然后洗板机洗板2次 （每次浸泡时间15秒），拍干反应板，每孔加A、B 底物液各1滴，混匀，置37℃温箱温15分钟，每孔加终止液50ul或1滴（2M H2SO4）， 混匀，即进行酶标仪读板。
1.2.2 统计学方法： 计量资料以x（_）表示，组间资料比较采用t检验，组内资料比较采用因素配伍组方差分析，存在统计学差异性意义（P<0.05）。
2 结果
2.1 2005 ---2010年间共筛查茂名地区公务员、.职工、教师等25282例， EBVCA/IgA （+）有850例（即筛查组），其EBVCA/IgA （+）的S/CO平均值为1.933；
2.2 研究组360例EBVCA/IgA的S/CO平均值为：研究组第一次EBVCA/IgA的S/CO平均值为1.523；研究组第二次EBVCA/IgA的S/CO平均值为1.505；研究组第三次EBVCA/IgA的S/CO平均值为1.501；研究组第四次EBVCA/IgA的S/CO平均值为1.495；研究组总的S/CO平均值为1.506；
2.3 对照组300例EBVCA-IgA的S/CO平均值为0.712；
2.4 筛查组、研究组、对照组血清EBVCA/IgA ELISA的S/CO平均值（x（_））见下表：
3 讨论
鼻咽癌是原发于鼻咽部的恶性肿瘤。在我国常见，发病率以广东省最高，有“广东癌”之称。男女病人之比例约为3：1 发病年龄大多为中年人，亦有青少年患病者。病因与EB病毒感染等密切相关[3-4]，，鼻咽癌恶性程度较高，早期即可出现颈部淋巴结转移。EB病毒可以通过唾液等途径传播，连同桌吃饭者都不可幸免。 鼻咽癌在世界大多数国家均极少见，但在我国东南数省份尤其是广东和广西最为突出。通过血清学普查测定EBVCA/IgA抗体可以协助诊断鼻咽癌，大大提高鼻咽癌的早期诊断率[5-8]。早期的治疗很简单，95%的病人只要使用放射化疗就可以治好；但如果鼻咽癌到了中晚期，治愈率分别下降到了70%和50%。“EB病毒的传播途径较广范，如唾液交换，打喷嚏、咳嗽、共用餐具、甚至接吻等这些日常生活细节都是常见的传播方式。切断EB病毒体液传播途径的方法，保护及关怀鼻咽癌高危人群，有可能达到预防或减少鼻咽癌发生”。
改良酶联免疫测定法测定[9]；基本能一次性消除纤维蛋白、红细胞及酶液残留孔间等干扰对测定的影响；其灵敏度高，特异性强，操作简单，消耗費用低，无需特殊仪器设备，技术要求不算高等优点，特别适合基层医院、社区等对传染病、肿瘤等病的大规模筛查，能够做到疾病早发现、早诊治、早预防，更好提高基层医疗卫生水平，为广大人民群众服务。
本研究的大规模筛查中，初筛850例EBVCA/IgA（+）的S/CO平均值为1.933，其中污染区严重及喜欢吃咸鱼区域EBVCA/IgA（+）人群比例增高，且S/CO平均值也较高，与鼻咽癌发病率增高相一致。研究组360例EBVCA/IgA（+）人群采取切断唾液等体液传播途径及给予关怀，用餐使用公筷等措施定期追踪EBVCA/IgA的S/CO值；其总的S/CO平均值为1.506，可能与避免重复交叉感染及减少二次免疫反应导致的抗体增高不多相关，可用免疫学反应原理来解释，多次免疫接种抗体产生量自然增多，机体内抗体浓度降低，间接预示体内EB病毒复制减少甚至消失。
鼻咽癌致病因素较多，病因治疗仍未完全彻底突破，预防显得尤为重要，从本研究中预示，切断EB病毒唾液等体液传播途径，使高危人群体内EB病毒复制减少，降低鼻咽癌发生率已初见成效，但是由于EB病毒感染的传播途径广泛且复杂，目前研究追踪高危人群数量还算不够多，仍有部分简易切断传播途径问题还在进行探讨中。
参考文献：
[1] Vasef MA ，Ferlito A ，Weiss LM. Nasopharyngeal Carcinoma with emphasis on its relationship to Epstein Barr Virus ，Ann Otol Rhinol Largngol，1997，106（4）：348-356.
[2] Feng P ， Clan SH ， Rachel Soo MY ，et al ，Antibody response to Epstein Barr Virus Rta Protein in patient with nasopharyngeal carcinoma. Cancer，2001，97（7）1872- 1881.
[3] 金和风，董学君.EB病毒和人乳头瘤病毒与鼻咽癌关糸探讨.浙江实用医学杂志，1999，6（8）：3-4
[4] 陈文思，卢建溪，叶少雄.EB病毒两种抗体联合检测在鼻咽癌诊断中的应用.热带医学杂志，2010，4（10）：434-436.
[5] 蔡永林，郑裕明，成积儒，等. EB病毒Rta/IgG， EBNA/ IgA，VCA/ IgA 及EA/ IgA抗体与鼻咽癌分期的关糸.南方医科大学学报，2010，30（3）： 509-511
[6] 李艳华，黄启洪.EB病毒抗体与鼻咽癌发病风险的前瞻性研究.中国肿瘤，2012，9（21）：670-672.
[7] 罗耀凌，欧国萍，池沛冬，等.联合检测EB病毒相关抗体和抗原对诊断鼻咽癌的价值.肿瘤，2009，28（1）：96-99.
[8] 邓兆享，张占书.EB病毒NA1-IgA和VCA-IgA抗体与鼻咽癌的诊断和疗效关糸.医药论坛杂志，2011，19（32）：108-110.
[9] 戚子惠，邱振华，陈瑞林.干扰酶联免疫测定的实验性研究.中国卫生检验杂志， 2008，20（8）：1983-1984.
作者简介：
戚子惠（1966--），大学专科，副主任技师，主要从事医学免疫学检验及研究工作。
【关健词】EBVCA/IgA；高危人群；筛查；追踪；鼻咽癌
【中图分类号】R739. 63 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）05-0511-02
The next analysis of high dangerous people for following nasopharyngeal carcinoma
QI Zi-hui，ZHU Hua-zhong，CHEN Rui-lin. LIU fa-he，ZHANG Da-heng.
（ Department of Clinical Laboratorary， People’ s Hospital of Maoming City， Maoming 525000，China.）
Corresponding author： QI Zi-hui ，Email ：QZH966@163.com
【Abstract】Objective：To reduce the rate of nasopharyngeal carcinoma for high dangerous people. Methods：Modified ELISA was applied to measuring serum EBVCA/IgA in 850 EBVCA/IgA（+）original controls（original control group） and in 300 healthy controls （healthy control group）， 360 EBVCA/IgA（+） subjects（study group：the first time 90， the second time 180， the third time 270 ， and the forth time 360 ）.Results：Modified ELISA results of EBVCA/IgA were 1.933 in serum of original controls， 1.523 in serum of study group in the first time ， 1.505 in serum of study group in the second time， 1.501 in serum of study group in the third time， 1.495 in serum of study group in the forth time， and 0.712 in serum of healthy control group .Statistical analysis of modified ELISA EBVCA/IgA results showed there was significant difference between original control group and study group . Conclusion：The means to reduce the rate of nasopharyngeal carcinoma for deference Epstein-Barr virus liquid travel is useful .
【Key words】EBVCA/IgA； High dangerous people； Screening； Track； Nasopharyngeal carcinoma
腫瘤是危害人类健康的严重疾病，到目前为止，肿瘤病因治疗方面全球性仍未彻底突破，从预防方面着手显得尤为重要。EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）是Epstein和Barr于1964年首次成功地将Burkitt非洲儿童淋巴瘤细胞通过体外悬浮培养而建株，并在建株细胞涂片中用电镜观察到疱疹病，EB病毒确可通过唾液等途经传播，常常连同桌吃饭者都不能避免。Nasopharyngeal Carcinoma （NPC）是与EBV密切相关的恶性肿瘤中最常见的一种[1-2]，也是研究报道较多的一种，在我国南方NPC是高发区。本研究通过大规模筛查鼻咽癌高危EBVCA/IgA（+）人群，对高危人群给予关怀，通过切断部分体液途径等方法可达到预防或减少鼻咽癌发生。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 2005---2010年间共筛查茂名地区公务员、.职工、教师等体检25282例，其中男性15132例，年龄介于18岁至82岁之间， 女性10150例，年龄介于18岁至79岁之间。 1.1.2 随机抽取筛查部分EBVCA/IgA （+）患者360例，其中男性240例，年龄介于18岁至75岁之间， 女性120例，年龄介于18岁至67岁之间。
1.1.3 研究组人群坚持用餐使用公筷，每半年追踪检测EBVCA/IgA一次，已进行了4次追踪，每次人数多增加90例，，即第一次90例，第二次180例，第三次270例，第四次360例，抽取研究组人群血样，分离血清，进行EBVCA/IgA检测。
1.1.4 随机抽取EBVCA/IgA （-）正常人群300例，其中男性170例，年龄介于18岁至33岁之间， 女性130例，年龄介于18岁至30岁之间。
1.1.5 仪器与试剂：酶标仪、洗板机为上海生产，型号分别为Multiskan MK3和Wellwash4MK2，离心机为北京离心机厂生产的LG2.4型， EBVCA/IgA ELISA试剂盒由北京新兴四寰生物技术有限公司提供。
1.2 方法
1.2.1 EBVCA/IgA ELISA改良法检测，（下称改良法）： 将EBVCA/IgA ELISA试剂盒从冰箱取出，放置室温下平衡1小时，用双蒸馏水稀释浓缩洗涤液，测定孔设置空白、阴性、阳性、质控孔各2个， ，正常对照组血清与筛查组血清及研究组的血清进行配对检测，空白对照孔加样本稀释液100ul，各检测孔同样加样本稀释液100ul后，正常对照组血清孔与筛查组血清孔及研究组的血清孔分别加指定样本10ul，空白对照孔除外，在反应板上加盖封板膜，振荡混匀，置37℃恒温水浴箱温育30分钟，洗板时先甩去板中反应混合液，用双蒸水快速冲洗板三次，轻拍干反应板，然后洗板机洗板2次 （每次浸泡时间15秒），拍干反应板，除空白孔外，所有孔加酶标记物液100ul（或2滴）， 在反应板上加盖封板膜，振荡混匀，，置37℃恒温水浴箱温育20分钟，洗板时先甩去板中反应混合液，用双蒸水快速冲洗板三次， 轻拍干，然后洗板机洗板2次 （每次浸泡时间15秒），拍干反应板，每孔加A、B 底物液各1滴，混匀，置37℃温箱温15分钟，每孔加终止液50ul或1滴（2M H2SO4）， 混匀，即进行酶标仪读板。
1.2.2 统计学方法： 计量资料以x（_）表示，组间资料比较采用t检验，组内资料比较采用因素配伍组方差分析，存在统计学差异性意义（P<0.05）。
2 结果
2.1 2005 ---2010年间共筛查茂名地区公务员、.职工、教师等25282例， EBVCA/IgA （+）有850例（即筛查组），其EBVCA/IgA （+）的S/CO平均值为1.933；
2.2 研究组360例EBVCA/IgA的S/CO平均值为：研究组第一次EBVCA/IgA的S/CO平均值为1.523；研究组第二次EBVCA/IgA的S/CO平均值为1.505；研究组第三次EBVCA/IgA的S/CO平均值为1.501；研究组第四次EBVCA/IgA的S/CO平均值为1.495；研究组总的S/CO平均值为1.506；
2.3 对照组300例EBVCA-IgA的S/CO平均值为0.712；
2.4 筛查组、研究组、对照组血清EBVCA/IgA ELISA的S/CO平均值（x（_））见下表：
3 讨论
鼻咽癌是原发于鼻咽部的恶性肿瘤。在我国常见，发病率以广东省最高，有“广东癌”之称。男女病人之比例约为3：1 发病年龄大多为中年人，亦有青少年患病者。病因与EB病毒感染等密切相关[3-4]，，鼻咽癌恶性程度较高，早期即可出现颈部淋巴结转移。EB病毒可以通过唾液等途径传播，连同桌吃饭者都不可幸免。 鼻咽癌在世界大多数国家均极少见，但在我国东南数省份尤其是广东和广西最为突出。通过血清学普查测定EBVCA/IgA抗体可以协助诊断鼻咽癌，大大提高鼻咽癌的早期诊断率[5-8]。早期的治疗很简单，95%的病人只要使用放射化疗就可以治好；但如果鼻咽癌到了中晚期，治愈率分别下降到了70%和50%。“EB病毒的传播途径较广范，如唾液交换，打喷嚏、咳嗽、共用餐具、甚至接吻等这些日常生活细节都是常见的传播方式。切断EB病毒体液传播途径的方法，保护及关怀鼻咽癌高危人群，有可能达到预防或减少鼻咽癌发生”。
改良酶联免疫测定法测定[9]；基本能一次性消除纤维蛋白、红细胞及酶液残留孔间等干扰对测定的影响；其灵敏度高，特异性强，操作简单，消耗費用低，无需特殊仪器设备，技术要求不算高等优点，特别适合基层医院、社区等对传染病、肿瘤等病的大规模筛查，能够做到疾病早发现、早诊治、早预防，更好提高基层医疗卫生水平，为广大人民群众服务。
本研究的大规模筛查中，初筛850例EBVCA/IgA（+）的S/CO平均值为1.933，其中污染区严重及喜欢吃咸鱼区域EBVCA/IgA（+）人群比例增高，且S/CO平均值也较高，与鼻咽癌发病率增高相一致。研究组360例EBVCA/IgA（+）人群采取切断唾液等体液传播途径及给予关怀，用餐使用公筷等措施定期追踪EBVCA/IgA的S/CO值；其总的S/CO平均值为1.506，可能与避免重复交叉感染及减少二次免疫反应导致的抗体增高不多相关，可用免疫学反应原理来解释，多次免疫接种抗体产生量自然增多，机体内抗体浓度降低，间接预示体内EB病毒复制减少甚至消失。
鼻咽癌致病因素较多，病因治疗仍未完全彻底突破，预防显得尤为重要，从本研究中预示，切断EB病毒唾液等体液传播途径，使高危人群体内EB病毒复制减少，降低鼻咽癌发生率已初见成效，但是由于EB病毒感染的传播途径广泛且复杂，目前研究追踪高危人群数量还算不够多，仍有部分简易切断传播途径问题还在进行探讨中。
参考文献：
[1] Vasef MA ，Ferlito A ，Weiss LM. Nasopharyngeal Carcinoma with emphasis on its relationship to Epstein Barr Virus ，Ann Otol Rhinol Largngol，1997，106（4）：348-356.
[2] Feng P ， Clan SH ， Rachel Soo MY ，et al ，Antibody response to Epstein Barr Virus Rta Protein in patient with nasopharyngeal carcinoma. Cancer，2001，97（7）1872- 1881.
[3] 金和风，董学君.EB病毒和人乳头瘤病毒与鼻咽癌关糸探讨.浙江实用医学杂志，1999，6（8）：3-4
[4] 陈文思，卢建溪，叶少雄.EB病毒两种抗体联合检测在鼻咽癌诊断中的应用.热带医学杂志，2010，4（10）：434-436.
[5] 蔡永林，郑裕明，成积儒，等. EB病毒Rta/IgG， EBNA/ IgA，VCA/ IgA 及EA/ IgA抗体与鼻咽癌分期的关糸.南方医科大学学报，2010，30（3）： 509-511
[6] 李艳华，黄启洪.EB病毒抗体与鼻咽癌发病风险的前瞻性研究.中国肿瘤，2012，9（21）：670-672.
[7] 罗耀凌，欧国萍，池沛冬，等.联合检测EB病毒相关抗体和抗原对诊断鼻咽癌的价值.肿瘤，2009，28（1）：96-99.
[8] 邓兆享，张占书.EB病毒NA1-IgA和VCA-IgA抗体与鼻咽癌的诊断和疗效关糸.医药论坛杂志，2011，19（32）：108-110.
[9] 戚子惠，邱振华，陈瑞林.干扰酶联免疫测定的实验性研究.中国卫生检验杂志， 2008，20（8）：1983-1984.
作者简介：
戚子惠（1966--），大学专科，副主任技师，主要从事医学免疫学检验及研究工作。