论文部分内容阅读
研究背景和目的:依据最新版头颈肿瘤WHO分类中的定义,鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是一种发生在鼻咽部黏膜在光镜下或超微结构中表现为鳞状分化改变的一种癌。具有明显的地理性差异,中国南部的发病率最高。中国的NPC发病主要以青壮年为主,而死亡人数以中老年为主。在头颈肿瘤WHO分类中,NPC被分为三种类型:角化性鳞状细胞癌、非角化性鳞状细胞癌和基底样鳞状细胞癌。三种类型均属于鳞状细胞癌。NPC均表达鳞状细胞的标志P63和P40,几乎全部肿瘤细胞对全角蛋白(AE1/AE3)和高分子量角蛋白(CK5/6等)表达强阳性,但不表达或低表达低分子量角蛋白CK7、CK8/18、CK8、CKL等。然而在日常病理实践中,我们发现有一部分发生在鼻咽部的低分化或未分化癌在免疫组织化学染色中并不表达鳞状细胞特异性蛋白P63、P40,也极少表达另一鳞状细胞标志CK5/6,这给我们带来了诊断方面的极大困惑。我们将此类鼻咽癌称为非鳞状表型鼻咽未分化癌(Non-squamous phenotype nasopharyngeal undifferentiation carcinoma,NSNPC),NSNPC 是否具有独特的生物学性质、是否仍属于NPC的一种,还是属于一个新的类型、是否有独特的预后,都是需要研究的问题。基于以上背景,本实验选取P63、P40共同阴性的鼻咽癌组织与经典的鼻咽癌组织,通过对比观察两组组织形态、鉴别免疫表型、查找病原体、筛查相关抑癌基因、超微结构分析、随访等方法对其进行研究,探究除经典鼻咽癌以外的类型,明确NSNPC的分型,研究NSNPC的临床病理特点,为NSNPC患者的明确诊断提供依据。材料和方法:1.收集临床资料:筛选2011-2019年间郑大一附院病理科数据库中诊断为鼻咽癌的病例(镜下为低分化或未分化形态)。然后从中收集P63、P40均阴性的病例为NSNPC组,仅25例,能进行后续蜡块实验的仅23例,占本院该期间被诊断为NPC总数量的3.28%;选择同时期、性别、年龄等因素相近的且P63、P40均阳性的病例20例为经典NPC组。两组病例均排除有过治疗史、冶游史的病例。2.HE染色及免疫组化检测:采用HE染色及免疫组织化学染色(鳞状细胞相关蛋白表达P63、P40、CK、CK5/6及用于鉴别诊断的相关蛋白CK8/18、CK8、CKL、CK7、Syn、CD56、CgA、SOX-10)观察组织学特点和免疫表型。抑癌基因检测:利用免疫组织化学的方法对比NSNPC与经典NPC中RASSF1、BLU、Rbms3三种抑癌基因的抗体在组织中表达是否一致。3.病原检测:检测NSNPC的病原体,EB病毒(原位杂交)及HPV病毒(荧光PCR)。4.超微结构观察:利用透射电子显微镜观察NSNPC超微结构组织学特点。5.预后及临床关系:研究NSNPC患者的病理特征、预后、生存率及临床病理关系。6.统计分析:使用Grahpad Prism 7统计软件进行数据分析。根据不同的数据处理方法及统计学对数据统计的不同要求,利用Fisher精确检验计算NSNPC与经典NPC两组之间的统计学差异,P值<0.05有统计学意义。结果:1.镜下特点及免疫表型:NSNPC癌组织在镜下具备两种特点,一类(1/25)肿瘤细胞呈巢团状/片状/乳头状分布,癌细胞形态似基底样细胞形态特点,可见较多核分裂像;另一类(24/25)肿瘤细胞呈合体样,在镜下呈2种生长方式:(1)肿瘤性上皮细胞形成境界清楚的癌巢,周围包绕着纤维组织和淋巴细胞;(2)肿瘤性上皮细胞呈弥漫性生长,与炎症细胞相互混杂,两类形态且都与经典NPC镜下形态相似。免疫组织化学结果显示NSNPC多呈低分子量角蛋白表达:CK8/18(78.26%)、CK8(65.22%)、CKL(47.83%),并且与经典 NPC组对比存在统计学差异(P<0.05);其它蛋白CK5/6、CK、CK7、Syn、CD56、CgA、SOX-10,与经典NPC组对比未存在统计学差异(P>0.05)。2.病原学检测:EBER 阳性18/23(78.26%),HPV分型检测阳性(HPV35/HPV38)2/23(8.70%),EB病毒感染是引起NSNPC的主要病原,与经典NPC对比P>0.05,无统计学意义。3.基因表达:抑癌基因BLU在NSNPC组织中表达未减少,且高于正常鼻咽组织,与经典NPC表达不一致且P<0.05。抑癌基因RASSF1及Rbms3在NSNPC组织中表达减弱,与经典NPC表达一致。4.超微结构特征:NSNPC整体在电镜下形态为相邻的两个癌细胞紧密接触,癌细胞体积大,核浆比例明显增大且核大呈圆形或卵圆形、空泡状,核膜光滑,核仁明显,多靠近核膜的一侧,粗面内质网增多,符合未分化鳞状细胞癌的超微结构特点。并且在5例中发现细胞之间有桥粒连接,余18例未见明显桥粒连接。统计学表明有无桥粒连接与其光镜下形态、死亡率、EBER及HPV阳性率及肿瘤分期、预后无相关性(P>0.05)。5.分期及预后:NSNPC 患者中 T1T2 期 20/23(86.96%)、T3T4 期 3/23(13.04%)、3年内复发1/23(4.35%)、死亡3/23(13.04%)。数据提示与经典NPC相比,NSNPC复发率低、临床分期较早(P<0.05),提示预后较好,而与年龄、性别、远处转移、死亡无明显关联(P>0.05)。结论:1.此类不表达P63、P40的鼻咽癌其组织学形态、病原学及基因改变均与经典NPC类似。其经常表达低分子量角蛋白CK8/18、CK8。2.NSNPC恶性程度较低,预后较好。3.超微结构结果显示NSNPC仍属于非角化鳞癌中的未分化型,为明确鼻咽癌临床病理诊断提供新的思路。其不表达P63和P40的机制可能在于癌变过程中并未通过P63相关通路。