【摘 要】
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目的和意义:碱性螺旋-环-螺旋转录因子dHAND和肌肉增强因子MEF2C都是心脏发育中特异表达的转录因子,它们在调控心肌形成、分化及心脏标志基因ANP和α-MHC的表达上起着十分重
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目的和意义:碱性螺旋-环-螺旋转录因子dHAND和肌肉增强因子MEF2C都是心脏发育中特异表达的转录因子,它们在调控心肌形成、分化及心脏标志基因ANP和α-MHC的表达上起着十分重要的作用.心钠素(ANP)在心脏发育早期连续地在心房和心室中表达,在发育后期特异地在心房中表达,并且具有调节血压和钠盐平衡的作用.α-MHC属于肌浆球蛋白重链,肌浆球蛋白重链是心脏中主要的收缩蛋白.因此,对ANP和α-MHC基因表达调控机制的研究有助于阐明心脏的发育机制,同时对阐明心肌肥大的发病机制具有重要指导意义.该研究的目的在于初步探讨dHAND和MEF2C调控心脏特异基因ANP和α-MHC表达的机制,同时也探讨了13-顺式视黄酸对心肌动蛋白Actin和ANP表达的影响.方法:采用转染,GST-Pulldown,免疫共沉淀,凝胶迁移率分析,RNAi,Northern Blot,Western blot和染色质免疫共沉淀等分子生物学实验方法来研究dHAND和MEF2C调控心脏特异基因ANP和α-MHC表达的机制以及1 3-顺式视黄酸对心Actin和ANP表达的影响.结论:该研究结果可以得到以下结论:1.dHAND和MEF2C相互结合成蛋白复合体并且作为心脏特异增强体的一部分来协同促进ANP基因启动子的转录活性,在H9c2细胞中,dHAND和MEF2C还协同促进α-MHC基因启动子的转录活性.2.dHAND和MEF2C协同促进ANP和α-MHC基因启动子的转录机制是通过二者相互直接结合形成复合体并且对于ANP来说是直接结合在A/T序列而实现的.3.0.5μM的13-顺式视黄酸使Actin的表达增强,但ANP的mRNA水平被13-顺式视黄酸所抑制.
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