白芷愈伤组织总香豆素的提纯化及合成调控

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伞形科白芷(Angelica dahurica)的干燥根是我国重要的中药材之一,野生白芷主要分布在我国的东北及华北地区,含有挥发油、香豆素类及多糖类等天然产物。白芷总香豆素是白芷的有效成分之一,具有多种药理作用。本研究以白芷愈伤组织为研究对象,测定了白芷愈伤组织中总糖、总酸和总酚的含量,对白芷愈伤组织中总香豆素类化合物的提取工艺及纯化条件进行了考察,研究了培养基成分及植物激素对愈伤组织中总香豆素合成的调控作用。本研究为利用白芷培养细胞生产有效药物成分及次生代谢产物相关研究奠定了基础。主要研究结果如下:1、测定了白芷愈伤组织中总酸度、总酚和总糖的含量,分别为1.261%、0.334%和0.662%。这些成分含量并不高,约为2.257%,可以选择合适的提取分离方法除去这部分杂质,为总香豆素的分离纯化奠定基础。2、采用单因素试验和正交试验优化了白芷愈伤组织中总香豆素的超声提取工艺,确定最佳提取条件为:料液比1:15、乙醇浓度60%、pH9、超声温度70℃、超声时间30min。欧前胡素在3.0-30.0ug/ml范围内与吸光度呈良好的线性关系(r=0.9999);平均加样回收率为98.03%,RSD=2.4%(n=10)。3、选择对总香豆素纯化效果较佳的D101大孔吸附树脂,采用单因素试验和正交试验法优化其分离纯化工艺为:吸附流速0.5mL/min,洗脱剂甲醇浓度95%,洗脱剂体积9BV,洗脱流0.5mL/min,总香豆素得率平均为67.44%。4、探讨了不同基本培养基、碳源和植物生长调节剂对白芷愈伤组织生长和总香豆素类化合物积累的影响。结果表明,有利于白芷愈伤组织生长的最佳培养基为B5+KT3.0mg/L+NAA0.2mg/L+30g/L葡萄糖。有利于白芷愈伤组织中总香豆素积累的最佳培养基为B5+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+30g/L蔗糖。本文建立了白芷愈伤组织中总香豆素的含量的测定方法-紫外分光光度法,得到了白芷愈伤组织中总香豆素超声提取以及大孔树脂纯化分离的相关参数,并探讨了影响白芷愈伤组织中总香豆素含量变化的培养基,为细胞培养生产白芷香豆素及其合成代谢途径研究建立了研究基础。
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