【摘 要】
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苹果炭疽叶枯病是近年来在我国苹果产区流行的一种新病害。该病害传播速度快、危害严重,对我国苹果产业发展造成严重威胁。果生刺盘孢是其主要病原。Ste12基因是受Fus3/Kss1-
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苹果炭疽叶枯病是近年来在我国苹果产区流行的一种新病害。该病害传播速度快、危害严重,对我国苹果产业发展造成严重威胁。果生刺盘孢是其主要病原。Ste12基因是受Fus3/Kss1-MAPK途径调控的一个转录因子,已知其在真菌生长发育和致病性方面有着重要的作用。为了明确Ste12在果生刺盘孢生长发育及其对寄主致病性调控作用,本论文以果生刺盘孢两个菌株1104-6、1104-7为供试菌株,基于基因重组原理的分片段标记法突变菌株中的Ste12基因,分析和测定突变体各项表型变化特征,取得以下主要研究结果:基于同源性分析从果生刺盘孢基因组中获得Ste12基因,其氨基酸序列与已知丝状真菌Ste12氨基酸序列一样,在N端具有STE homeodomain,在C端有锌指结构域。利用基因敲除技术获得Ste12基因缺失突变体。突变体与野生型表型比较发现,Ste12基因缺失不影响其菌落形态、菌丝生长速率、分生孢子产量和附着胞形态,但是分生孢子的萌发比率、附着胞的形成比率显著下降,不能穿透洋葱鳞片叶内表皮。部分分生孢子萌发产生了畸形的次级分支菌丝而不是附着胞。致病性测定显示无伤接种突变体失去对嘎拉叶片和果实的致病能力,有伤接种可以定殖嘎拉果实引起腐烂症状,但是病斑面积明显减小。在有性生殖方面,突变体产生的子囊壳较野生型小,且形状多不规则,子囊壳内完全不产生子囊和子囊孢子。通过恢复载体构建和原生质体转化,获得回复突变体,在附着胞穿透、嘎拉叶片的致病性,以及子囊壳数量、形态及子囊孢子的产生等表型均与野生型一致。综合以上试验结果,我们认为果生刺盘孢转录因子Ste12参与分生孢子萌发、附着胞形成及其对寄主的穿透和定殖过程,调控子囊壳的形成及形态、子囊及子囊孢子产生等有性器官发育。
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