目的:探讨表皮干细胞向神经细胞分化的影响因素。方法: 1.分离3-4天的SD大鼠表皮基底层细胞,利用10分钟贴壁法分离出表皮干细胞。2,用免疫组织化学法测定K15、β1整合素、CD34和巢蛋白(nestin)来鉴定培养出的表皮干细胞。3.加入不同的培养基:K-SFM、NEUROBASALTM-A和DMEM培养分离出的表皮干细胞,并观察不同培养基组细胞形态的变化。4.通过调整不同浓度的bFGF,观察表皮干细胞的形态变化。5.用K-SFM为培养基培养表皮干细胞,以表皮干细胞的细胞密度分组,分为0.5×10~7/ml组、0.3×10~7/ml组、0.1×10~7/ml组、0.5×105/ml,每组均加入20ng/ml的bFGF,观察其细胞形态发生以及细胞标记物的改变。结果:1.利用十分钟贴壁法成功分离出表皮干细胞。分离出来表皮干细胞细胞密度大,细胞呈圆形或多角形,细胞形态清晰,胞质均匀,可见有核分裂细胞,核质比例大,其特征性标记分子K15及β整合素表达阳性。2.表皮干细胞在NEUROBASALTM-A和DMEM培养基中均出现细胞体积增大,细胞膜边界不清,细胞核溶解、核碎裂、细胞死亡。3.表皮干细胞在K-SFM培养基中,加入bFGF的浓度为0ng/ ml、5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml时,细胞形态没有明显改变,呈圆形或多角形,细胞形态清晰,胞质均匀,可见有核分裂细胞,核质比例大;当加入的bFGF浓度为20ng/ml时, 24h即可见到细胞开始伸展,呈多角形、圆形或短棒样,分布比较均匀,第3-4天可看到部分细胞呈铺路石样,细胞体积增大,核质比例变小,可见有分裂核细胞,极少部分细胞呈现双极,多极细胞改变,约一周后,双极、多极细胞消失,部分铺路石样细胞形成克隆,细胞90%融合。4.在0.3×10~7/ml组和0.1×10~7/ml组, 24h-48h可见到细胞开始伸展,呈多角形、圆形或短棒样,分布比较均匀,第5-6天可看到部分细胞呈铺路石样改变,细胞体积大,核质比例变小,可见有分裂核细胞,部分细胞呈出现双极,多极细胞改变,约一周后,双极、多极细胞增多。免疫组织化学nestin、NSE染色阳性,β1整合素、CD34染色阴性; 0.5×10~6/ml组,约3-4天后可见到散在的伸展,呈多角形、圆形或短棒样的细胞,大部分细胞一直未伸展; 0.5×10~7/ml组, 24h即可见到细胞开始伸展,呈多角形、圆形或短棒样,分布比较均匀,第3-4天可看到部分细胞呈铺路石样,细胞体积增大,核质比例变小,可见有分裂核细胞,极少部分细胞呈现双极,多极细胞改变,约一周后,双极、多极细胞消失,部分铺路石样细胞形成克隆,细胞90%融合。结论1.10分钟快速贴壁法可以培养出表皮干细胞,表皮干细胞的特征性标记分子K15及β1整合素表达阳性,CD34、nestin表达阴性。3.培养表皮干细胞细胞的最佳培养基为K-SFM。4.通过bFGF可诱导表皮干细胞向神经系分化,bFGF对表皮干细胞的诱导具有细胞密度依赖性。