苏拉明对兔自体静脉移植物内膜增殖的影响前言冠状动脉粥样硬化性心脏病是严重威胁人类健康的疾病之一,冠状动脉旁路移植术(coronary artery bypass graft, CABG)是治疗该病的重要手段,尤其对于那些多支病变和具有多个危险因素的患者。静脉移植物(静脉桥)血管由于其取材方便、数量充足、吻合容易而仍将被广泛使用,但其再狭窄率偏高,目前仍然没有好的解决办法。手术机械损伤、缺血再灌注损伤以及血流动力学改变,可引起移植静脉内皮细胞脱落及功能不全；刺激了血小板源性生长因子(PDGF)等生长因子的释放；导致血管壁平滑肌细胞(smooth muscle cell, SMC)由收缩型向增生型转变。移植静脉SMC增殖并向内膜迁移,合成、分泌细胞外基质(extracellular matrix, ECM),形成增厚的新生内膜。SMC增殖与迁移是内膜增生的关键步骤。苏拉明是一种多磺酸萘醌盐70年代被用于治疗AIDS病及一些恶性肿瘤,发现其具有强大的药理作用,其机制阻断生长因子和相应受体结合,并对蛋白酶类有一定的抑制作用。在兔动脉成形术模型中全身应用苏拉明,有抑制动脉内膜增生的效果。本文拟探讨局部短期应用苏拉明对兔移植静脉内膜增生的影响。材料与方法一、实验材料1、实验动物由中国医科大学实验动物部提供,健康日本大耳白兔,雄性,体重2.5-3.0kg。2、主要药品和试剂PCNA抗体、PDGF-B抗体二抗及DAB染色剂速眠新注射液、多聚甲醛戊巴比妥、肝素注射液苏拉明、戊二醛3、器械及仪器8-0手术带针缝线,显微基础器械分析天平、微波炉、照相机切片机、图像分析仪OLYMPUS光学显微镜JEM-1200EX透射电镜二、实验方法建立兔的颈动脉旁路移植模型,速眠新肌肉注射、戊巴比妥纳腹腔注射麻醉,颈部正中切口,将右侧部分颈外静脉吻合到右侧颈总动脉中间。实验组给予苏拉明1mg／ml中处理,对照组给予生理盐水处理,假手术组不予移植静脉。术后21天取材,用4％多聚甲醛溶液或2.5％的戊二醛溶液固定,行HE染色测量内膜、中膜厚度、内膜中膜比值；免疫组织化学检查PCNA、PDGF-B的阳性细胞计数；透射电镜观察血管平滑肌的超微结构改变。三、统计学分析应用SPSS 13.0统计软件包对数据进行处理。计量数据用均数±标准差((?)±s)表示,组间比较采用t检验,检验水准α=0.05。结果1.HE染色：术后21天,苏拉明处理组移植静脉内膜厚度、中膜厚度(44.4±10.80μm、68.3±10.09μm)明显低于生理盐水组(67.2±11.31μm、84.1±10.30μm)两组静脉内膜、中膜厚度差异显著(P<0.01)2.免疫组化测定PCNA、PDGF-B的表达：增殖细胞核抗原(PCNA),细胞核内表达，呈棕黄色、褐色。苏拉明组可见PCNA阳性细胞明显减少；血小板源性生长因子(PDGF-B)胞浆内表达呈棕黄色、褐色,苏拉明组PDGF-B阳性细胞明显减少。3.透射电镜观察平滑肌细胞的改变：生理盐水组多见平滑肌细胞胞体显著增大,胞核内染色质聚集,核形不规则,胞浆含有粗面内质网,核糖体和线粒体及较多的囊泡等细胞器呈增生型改变。苏拉明组结构多保持完整,平滑肌细胞核呈梭形,核膜光滑,核中染色质分布均匀,胞浆细胞器较少,收缩型特点。结论局部短时间应用苏拉明对兔自体静脉移植物内膜增生有抑制作用,可能与其抑制血小板源性生长因子(PDGF-B)的表达,抑制血管平滑肌细胞的增殖有关。