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目的:研究单核细胞和肺微血管内皮细胞的HA分布、HA受体CD44和ICAM-1的表达以及HA及其受体对单核细胞粘附和迁移的作用.材料和方法用Percoll非连续密度梯度两次离心法分离狗静脉血单核细胞,用两次植块法分离狗PMVECs.通过亲和荧光染色标记单核细胞以及PMVECs的HA,用免疫荧光染色法标记单核细胞和PMVECs的CD44以及单核细胞的ICAM-1.经HAase消化单核细胞表面的HA后,观察单核细胞的粘附.通过在培养皿底面涂布HA和在培养液中添加HA,比较单核细胞的粘附.用抗体阻断单核细胞的CD44和ICAM-1后,比较粘附的单核细胞数目.在单核细胞与PMVECs共培养实验,消化单核细胞表面的HA和阻断单核细胞的CD44后,观察单核细胞在内皮单层上的粘附,并在扫描电镜下观察单核细胞粘附于内皮单层后的形态学特征.通过用HAase消化掉单核细胞表面的HA、在细胞培养池膜上涂布HA和在培养液中添加HA,计数跨膜迁移的单核细胞.阻断单核细胞的CD44和ICAM-1后,观察单核细胞跨膜迁移的变化.结果:经Percoll非连续密度梯度两次离心法分离的单核细胞以及经两次植块法分离的PMVECs,纯度为95﹪以上.该实验分离的单核细胞和PMVECs具有较高的活性.单核细胞表面和细胞内存在HA,表达CD44和ICAM-1.PMVECs表面有HA,表达CD44.用HAase消化掉单核细胞表面HA后,粘附于培养皿底的单核细胞减少,粘附于内皮单层上的单核细胞无明显变化.在培养皿底面涂布HA后,粘附的单核细胞增多.在培养液中加入HA后,粘附的细胞减少.阻断单核细胞的CD44后粘附于HA底物和内皮单层上的单核细胞减少.阻断ICAM-1后粘附于HA底物的细胞数无明显变化.消化单核细胞表面的HA后,跨膜迁移的单核细胞减少.在细胞培养池的膜上面涂布HA后,跨膜迁移的单核细胞增多.培养液中添加HA后,跨膜迁移的单核细胞减少.阻断单核细胞的CD44后,跨膜迁移的细胞减少.阻断ICAM-1后跨膜迁移的细胞数无明显变化.结论:单核细胞Percoll非连续密度梯度两次离心法和PMVECs两次植块法具有方法简便、分离细胞的纯度和活性高等优点.单核细胞表面和细胞内分布有HA,在细胞表面表达CD44和ICAM-1.PMVECs表面存在HA,表达CD44.单核细胞表面HA和底物HA促进单核细胞的粘附,但游离HA阻碍单核细胞的粘附.CD44对于单核细胞粘附于HA底物和肺微血管内皮具有介导作用.单核细胞表面HA和底物HA促进单核细胞的迁移,但游离HA阻碍单核细胞的迁移.CD44介导底物HA对单核细胞迁移的促进作用.