长牡蛎左右壳与左右外套膜的不对称性研究

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长牡蛎(Crassostrea gigas)是双壳贝类研究的模式生物,具有重要的经济及研究价值,其养殖业在全世界范围内受到普遍重视。外形美观,个体大一直是长牡蛎选育的重要性状。但是,与大多数双壳贝类不同的是长牡蛎的外形非常不规则,严重影响其产品价值。已有研究显示,影响长牡蛎外观的左右对称器官(外壳及外套膜)不仅外形存在差异,功能亦各有不同。左右外壳在外形上呈现左大右小,左壳一旦固着终生无法移动,右壳则负责开闭壳活动。而外形对称的外套膜在分子功能上表现出在壳形成、信息素、神经传导和酶活性等多个方面的差异。本研究力求通过多层面的比较分析,了解长牡蛎外壳及外套膜组织中的不对称性情况,为长牡蛎选育品种的进一步改良,提供新方向。主要研究结果如下:1.长牡蛎左右壳在壳长、壳宽、壳高、壳重等基础指标中均存在显著差异(p<0.05),其中,壳高及壳重差异极显著(p<0.01)。对长牡蛎左右壳的壳形指标与软体部重量进行相关性分析,发现长牡蛎左壳壳重与软体部重量相关性最高,相关系数为0.918。这表明在长牡蛎壳形指标与软体部重量的关联中,左壳壳重是壳形性状中最能影响软体部重量的指标。2.长牡蛎的左右外套膜在肌肉成分含量及抗氧化酶活性上存在一定差异。组织切片及肌酸酐含量结果均显示出,相比于右侧,左侧外套膜的肌肉成分更高。且参与肌肉生成的转录因子Cg Tcf21基因与此变化趋势一致。表明左侧外套膜组织的收缩能力可能更强。在右侧外套膜中3种氧自由基及丙二醛(Malondialdehyde)的含量显著高于左侧(p<0.05),表明右侧积累的氧化性损伤更多。而在右侧外套膜中超氧化物歧化酶(Superoxide smutase)活性显著高于左外套膜(p<0.05),表明右侧清除活性氧自由基的生理活动较为活跃。3.Pitx2是可在成体中继续表达的重要左右不对称发育调控基因。通过对长牡蛎Cg Pitx2基因序列进行生物信息学分析,发现Cg Pitx2的基因序列较为保守,开放阅读框873 bp,共编码290个氨基酸,预测蛋白质分子量为32.45 k Da,且与虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)、魁蚶(Scapharca broughtonii)和斑马鱼(Danio rerio)的Pitx2基因相似度较高。荧光定量的结果显示,长牡蛎右外套膜Pitx2基因表达量极显著高于左外套膜(p<0.01),虾夷扇贝左外套膜Pitx2基因表达量显著高于右外套膜(p<0.05),而魁蚶Pitx2基因在左右外套膜中表达量基本相同。此表达趋势均与壳的外形大小有关,Pitx2均是在壳形较小一侧的外套膜中表达量更高,且长牡蛎左右外套膜中PITX2蛋白的表达量与基因的差异变化趋势一致,上述结果表明Cg PITX2可能是调控长牡蛎左右不对称的重要分子,分析其表达量差异,可掌握长牡蛎的左右不对称差异情况;调控此基因表达,可对长牡蛎的外壳性状进行分子选育。本研究分别对长牡蛎左右壳的差异、左右外套膜的差异及左右外套膜中Pitx2的差异进行了研究,分析了造成长牡蛎左右不对称差异的原因,为进一步选育出优质的长牡蛎新品系提供了基础数据。
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