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研究背景及目的胃癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一,在中国,胃癌发病率和死亡率均居前列。由于早期症状不典型,胃癌确诊时多数已是中晚期,预后差,药物成为最重要的治疗手段。然而,现有化疗方案疗效难以取得进展,尚缺乏有效的靶向治疗药物。因此,亟需探索发现抗胃癌治疗新策略、新靶点以改善患者预后。MiRNAs是基因表达的关键调控因子,与胃癌发生发展关系密切,被认为是一类新的基因治疗靶点。质子泵抑制剂（Proton pump inhibitors,PPIs）近年成为药物再定位研究的一个热点,在抗肿瘤领域展现了多重药物作用。我们前期研究发现,埃索美拉唑具有直接的胃癌细胞毒性,能够抑制胃癌细胞增殖、侵袭、迁移,诱导细胞凋亡和自噬,并促进顺铂化疗敏感性,而作用中的机制仍不明确。进一步基因测序分析发现,埃索美拉唑作用前后胃癌细胞miRNA表达谱发生显著差异,胃癌细胞中miRNA-22-5p表达显著上调。MiRNA-22-5p在多种恶性肿瘤中呈现抑癌基因特性,但在胃癌中尚未见报道。因此,本研究旨在进一步验证埃索美拉唑对胃癌细胞中miRNA-22-5p表达的上调作用及miRNA-22-5p对胃癌细胞作用的影响,初步明确miRNA-22-5p对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及可能的分子机制,为两者联合用于抗胃癌治疗应用提供实验依据。研究方法（1）用CCK-8法检测埃索美拉唑（80 mg/L）对人胃癌AGS、SGC-7901细胞增殖活力的影响。（2）用Transwell侵袭迁移实验方法检测埃索美拉唑（80 mg/L）、miRNA-22-5p模拟物及其联合对人胃癌AGS、SGC-7901细胞侵袭、迁移能力的影响。（3）用qRT-PCR法检测埃索美拉唑（80 mg/L）、miRNA-22-5p模拟物、miRNA-22-5p抑制剂作用后人胃癌AGS、SGC-7901细胞miRNA-22-5p表达情况。（4）通过CCK-8法、Ed U法和集落形成实验检测miRNA-22-5p模拟物对人胃癌AGS、SGC-7901细胞增殖能力和集落形成能力的影响。（5）通过CCK-8方法检测埃索美拉唑（80 mg/L）、miRNA-22-5p模拟物、miRNA-22-5p抑制剂及其联合对人胃癌AGS、SGC-7901细胞增殖活力的影响。（6）Western Blot方法检测miRNA-22-5p模拟物对人胃癌AGS、SGC-7901细胞中细胞增殖相关蛋白（c-MYC、PCNA）,侵袭迁移相关蛋白（MMP-9、M MP-2）,以及PI3K/AKT信号通路蛋白PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达水平的影响。（7）使用Targetscan、MiRDB、MiRTar BASE靶基因预测数据库预测miRNA-22-5p可能的靶基因,采用q RT-PCR方法及Western Blot方法对靶基因进行验证。（8）统计学方法:多组间计量资料均值比较采用单因素方差分析,两组之间计量资料均值比较采用t检验分析,P＜0.05为差异有统计学意义。结果（1）与空白对照组相比,埃索美拉唑作用后,胃癌AGS、SGC-7901细胞活力显著降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。（2）与空白对照组相比,埃索美拉唑作用后,胃癌AGS、SGC-7901细胞发生侵袭、迁移的细胞数目明显减少,细胞侵袭迁移能力明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）。（3）与空白对照组相比,埃索美拉唑作用后,胃癌AGS、SGC-7901细胞中miRNA-22-5p表达增加,差异有统计学意义（P＜0.05）。（4）与对照组相比,miRNA-22-5p模拟物作用组胃癌AGS、SGC-7901细胞中miRNA-22-5p表达升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;miRNA-22-5p抑制剂组细胞中miRNA-22-5p表达稍下降,差异无统计学意义（P＞0.05）。（5）与对照组相比,miRNA-22-5p模拟物组胃癌AGS、SGC-7901细胞活力降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,miRNA-22-5p抑制剂组胃癌AGS、SGC-7901细胞活力无明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）。（6）与对照组相比,miRNA-22-5p模拟物作用组胃癌AGS、SGC-7901细胞中Ed U阳性细胞比例显著降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,表明正在进行复制的胃癌AGS、SGC-7901细胞比例降低。（7）与对照组相比,miRNA-22-5p模拟物组胃癌AGS、SGC-7901细胞单个细胞形成细胞集落的数量减少,差异有统计学意义（P＜0.05）。（8）与对照组相比,miRNA-22-5p模拟物组胃癌AGS、SGC-7901细胞发生侵袭、迁移的细胞个数明显减少,差异有统计学意义（P＜0.05）。（9）与埃索美拉唑组、miRNA-22-5p模拟物组相比,埃索美拉唑联合miRN A-22-5p模拟物组胃癌AGS、SGC-7901细胞活力更低,差异有统计学意义（P＜0.05）,表明miRNA-22-5p可促进埃索美拉唑的抗增殖活性。（10）与埃索美拉唑组相比,埃索美拉唑联合miRNA-22-5p抑制剂组胃癌A GS、SGC-7901细胞活力增高,差异有统计学意义（P＜0.05）,表明抑制miRNA-22-5p可部分抵消埃索美拉唑的抗增殖作用。（11）与埃索美拉唑组、miRNA-22-5p模拟物组相比,埃索美拉唑联合miR NA-22-5p模拟物组胃癌AGS、SGC-7901细胞侵袭、迁移的细胞个数更少,差异有统计学意义（P＜0.05）,表明miRNA-22-5p可促进埃索美拉唑对胃癌细胞侵袭、迁移的抑制作用。（12）与对照组相比,miRNA-22-5p模拟物组细胞中增殖相关蛋白c-MYC、PCNA和侵袭迁移相关蛋白MMP9、MMP2表达水平降低,PI3K/AKT信号通路蛋白PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT表达水平也显著降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。（13）使用Targetscan、MiRDB、MiRTar BASE数据库预测,KIF14为miRNA-22-5p下游调节候选靶基因。q RT-PCR和Western Blot验证结果显示,与对照组相比,miRNA-22-5p模拟物组胃癌AGS、SGC-7901细胞中KIF14 m RNA和蛋白表达水平降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,这初步表明KIF14为miRNA-22-5p的下游调节靶基因。结论1.MiRNA-22-5p能有效抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移,机制可能与其抑制PI3K/AKT信号通路和KIF14表达有关。2.埃索美拉唑上调胃癌细胞中miRNA-22-5p表达,与miRNA-22-5p模拟物联合具有协同抗癌效应,可能是一种胃癌治疗潜在策略。